A anemia falciforme (AF) é uma doença hereditária caracterizada por um quadro hemolítico e inflamatório crônico. O aumento da liberação de citocinas pro- inflamatórias e a adesão celular ao endotélio vascular contribuem para a oclusão de vasos na microcirculação e subsequente dano aos tecidos, culminando em dor e outras complicações que variam entre os pacientes. Uma importante molécula no processo de adesão celular e de vaso-oclusão é a P-selectina. Como resultado da inflamação e da hipóxia, a P-selectina, exposta na superfície endotelial, leva ao aumento da adesão de leucócitos e de hemácias falcizadas, contribuindo para a vaso-oclusão. Dada a sua importância para a AF, é provável que polimorfismos no gene que codifica a P-selectina (SELP) podem estar associados a um quadro clínico adverso nos pacientes com AF. Assim, o objetivo deste trabalho é investigar a associação de polimorfismos no gene SELP e os níveis plasmáticos da P-selectina solúvel (sP-selectina) e correlacionar com o quadro clínico de pacientes com AF acompanhados na Fundação HEMOPE. Foram selecionados para o estudo 300 pacientes com AF com acompanhamento regular, maiores de 18 anos. Os perfis clínicos e laboratoriais dos pacientes foram obtidos a partir dos prontuários médicos. Os polimorfismos do gene SELP, −1969G/A (rs1800805), G1057A Ser290Asn (rs6131) e G1980T Leu599Val (rs6133), foram genotipados utilizando sondas TaqMan®, e a dosagem da sP-selectina foi realizada pela técnica de ELISA. O gene SELP figura como um importante marcador molecular dos desfechos clínicos da doença. Neste trabalho, demonstramos pela primeira vez a associação dos SNPs de SELP rs6133 e rs1800805.

Os eventos macroecológicos passados no Nordeste brasileiro, como os ciclos glaciais e interglaciais no Pleistoceno e a formação da Diagonal Seca, moldaram a estrutura genética exibida por populações atuais nas diferentes escalas espaciais. Os répteis são excelentes modelos de estudos filogeográficos devido a sua ecologia e fisiologia. A espécie Philodryas olfersii, é uma serpente semi-arborícola que se distribui amplamente na América do Sul. Nosso principal objetivo foi avaliar a estruturação populacional existente em P. olfersii, determinando quais fatores estão influenciando sua distribuição genética. O DNA de indivíduos dos estados de Pernambuco, Paraíba, Alagoas e Rio Grande do Norte, foi extraído e submetido ao processo de PCR para os marcadores moleculares 16S, ND4 e COI. A diferenciação genética foi inferida pela AMOVA e valores de FST e a estruturação populacional foi realizada pelo pacote Geneland no software R. Ao todo foram utilizadas 17 amostras de 16S, 9 amostras de ND4 e 20 de COI. Os resultados da AMOVA destacara que existe mais diferenciação genética dentro das populações do que entre elas. Os valores de FST indicaram que existem populações geneticamente bem distintas, enquanto outras são mais similares. O Geneland recuperou a existência de populações genéticas bem definidas, sendo uma na região mais sul agrupando Alagoas, sul de Pernambuco e Piauí, outro cluster agrupando a Região Metropolitana de Recife e Paraíba, e outro mais ao norte com as amostras do Rio Grande do Norte.

O câncer de mama hereditário, vinculado a variantes patogênicas em genes de alta penetrância representa cerca de 5-10% dos casos. Este estudo buscou analisar esses genes, proporcionando uma visão atualizada sobre o tema. A revisão envolveu 3103 artigos, priorizando a origem das publicações. Foi realizada uma análise detalhada das variantes patogênicas e provavelmente patogênicas no ClinVar em BRCA1, BRCA2, CDH1, PALB2, PTEN, STK11 e TP53, selecionadas pelas associações com o maior número de condições clínicas. Observou-se uma frequência elevada de publicações nos países do Hemisfério Norte, em detrimento da África e América Latina. Em todos os genes estudados, variantes com conflitos de classificações foram identificadas. As variantes em BRCA1 e BRCA2, como c.5153-2del e c.1909+1G>A, destacaram-se. CDH1 apresentou a variante c.1901C>T como mutação fundadora em Portugal. Em PALB2, a variante c.757_758del foi prevalente em populações miscigenadas. PTEN exibiu as variantes c.209+1G>A e c.634+5G>A, predominantes em populações europeias finlandesas e americanas miscigenadas. STK11 destacou as variantes c.290+1G>A, c.464+1G>T e c.719C>A, com maiores frequências alélicas em populações afroamericanas, europeias e sul-asiáticas. Em TP53, a variante c.799C>T foi associada a múltiplas condições, predominando em populações sulasiáticas e europeias. No geral, este estudo demonstrou a importância de uma atualização do conhecimento relacionado aos genes de alta penetrância envolvidos no câncer de mama hereditário.

Os tripanosomatídeos são protozoários flagelados responsáveis por várias doenças tidas como negligenciadas e se caracterizam por apresentar algumas peculiaridades biológicas no que diz respeito a mecanismo de controle da expressão gênica, regulada por eventos predominantemente pós-transcricionais e que inclui eventos regulatórios durante a tradução dos mRNAs. Em eucariotos, o reconhecimento do cap do mRNA pela subunidade 4E do complexo heterotrimérico eIF4F é considerado um elemento chave no processo de iniciação da tradução, tendo em vista que diferenças cinéticas nas interações eIF4F-mRNA podem mediar diferenças na eficiência da tradução entre mRNAs. Múltiplos homólogos foram identificados em tripanosomatídeos formando diferentes complexos do tipo eIF4F. Esse trabalho buscou estudar e caracterizar o complexo formado pelas proteínas EIF4E6/EIFG5/EIFG5-IP em T. brucei. Foram investigadas as interações moleculares envolvidas na interação EIF4E6/EIF4G5 por ensaios in vitro de interação de proteína-proteína e cristalografia. Onde um peptídeo na região N-terminal da EIF4G5 é responsável pela formação e interação entre a proteína EIF4E6 pertencente ao complexo. Posteriormente buscamos mapear as interações envolvidas entre o EIF4G5/EIF4G5-IP para isso três regiões conservadas no EIF4G5 sofreram substituição de seus aminoácidos para codificação de alaninas por mutagênese sítio dirigida e foram expressas em células procíclicas fusionadas ao epítopo HA e usadas em ensaios de imunoprecipitação. A análise de proteínas coprecipitadas mostraram a perda da interação entre as proteínas EIF4G5 e EIF5G5-IP sem ocorrer nenhum impacto na interação com a terceira proteína pertencente ao complexo, TbEIF4E6. E a presença de inúmeras proteínas da zona de fixação do flagelo e de citoesqueleto, por fim, confirmamos a atuação desse complexo na fase sanguínea atuando no processo de tradução, com a presença de diversas proteínas ribossomais 40S e 60S, além de outros fatores de tradução. Sendo assim, nossos experimentos devem ajudar a entender melhor o papel deste complexo na espécie de T. brucei.

A nefrite lúpica (NL) é uma das características clínicas mais comuns do Lúpus Eritematoso Sistêmico e atinge até 70% dos pacientes. Além disso, é um dos sintomas que mais provocam morbidade e mortalidade nos pacientes com a doença. A busca por um biomarcador mais específico e que consiga predizer a resposta e o direcionamento do tratamento da NL é um desafio para a clínica. Entre os biomarcadores propostos, fatores genéticos associados a resposta inflamatória e imunológicas têm sido amplamente estudados. Nesse contexto, a Via WNT βcatenina tem sido apontada com um papel importante nas doenças inflamatórias crônicas e aut oimunes. A partir disso, o presente trabalho buscou avaliar o perfil de expressão gênica de genes da via WNT de sinalização ( DKKI, SOST, LRP5, WNT2, WNT16 e BMP2) em diferentes momentos durante o tratamento da NL, por meio de um estudo prospectivo. Foram selecionados doze pacientes para o estudo avaliados clinicamente e que estavam de acordo com os critérios do estudo. Além disso,foram realizadas coletas de sangue periférico, para a posterior extração do RNA e síntese do cDNA, e análise de expressão gênica. As coletas foram realizadas no início da terapia de indução para a NL e 3 meses após o segmento de tratamento. Nossos resultados mostraram que o Score do SLEDAI e a dose de prednisona mostraram diferenças estatisticamente significativas quando comparados os tempos 0 e após 3 meses de tratamento (p = 0,01). Entretanto, a análise da expressão gênica não demonstrou diferença significativa entre os genes avaliados nos diferentes momentos avaliados. Desse modo, concluímos que o período de 0 a 3 meses para os parâmetros avaliados não foi suficiente para se obter resultados significativos tanto dos parâmetros clínicos e laboratoriais, quanto para o padrão de expressão dos genes avaliados, necessitando assim de um maior período de acompanhamento da coorte em estudo.

Dentre as complicações clínicas da anemia falciforme (AF), o acidente vascular cerebral (AVC) é a de maior gravidade. A ultrassonografia com Doppler transcraniano (DTC) é uma ferramenta de triagem que pressagia o risco de AVC, levando ao início da terapia profilática, mas apresenta algumas limitações intrínsecas, sendo necessária a identificação de novos indicadores que o auxiliem. O CAV1 um interessante modulador molecular para avaliação desse risco sendo responsável por codificar a proteína caveolina-1, que regula vias de sinalização e processos que estão envolvidos com a fisiopatologia do AVC na AF, principalmente por regular negativamente a biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), importante vasodilatador. Para este estudo foram selecionados 3 polimorfismos no gene CAV1: rs3807989, rs7804372 e rs1997623. Selecionamos 339 indivíduos com AF menores de 20 anos de idade acompanhados na Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco (HEMOPE), Recife-PE. As genotipagens para os polimorfismos ocorreram por PCR em tempo real com discriminação alélica utilizando sondas TaqMan no aparelho QuantStudio® 5. Os polimorfismos rs3807989 e rs7804372 não se mostraram associados estatisticamente com as variáveis analisadas. Já o rs1997623 demonstrou associação estatisticamente relevante com o AVC (p=0,003) e Doença Cerebrovascular (P=0,011). Além disso, o alelo selvagem "A" demonstrou estar mais relacionado com o  AVC (P = 0.0032; OR: 2.568; IC: 1.374 – 4.655) e com a DCV (P = 0.0092; OR: 1.950; IC: 1.205 – 3.160) quando  comparado ao alelo mutado "C", conferindo ao rs1997623 caráter protetivo contra essas condições avaliadas, sendo necessários ainda estudos futuros para a confirmação destes resultados visto que o AVC é uma doença multifatorial.

A síndrome de Down (SD) é resultado da trissomia do cromossomo 21, possuindo uma prevalência estimada de 1:800 nascidos vivos. A SD é considerada a causa genética mais comum de deficiência intelectual e os indivíduos apresentam uma variedade de manifestações clínicas que podem afetar múltiplos sistemas. Indivíduos com SD apresentam frequência elevada de doenças autoimunes e inflamatórias crônicas comparados à população em geral. Estudos envolvendo genes importantes na regulação do sistema imunológico, como o CTLA-4, PTPN22 e o VDR vem sendo relacionados com o desenvolvimento dessas doenças na população em geral, mas na SD os dados são limitados. O objetivo desse estudo é avaliar o perfil de expressão dos genes CTLA-4, VDR e PTPN22 em indivíduos SD e grupo controle saudável. O cariótipo dos indivíduos com SD foram obtidos pela cultura de linfócitos e cerca de 20 metáfases foram analisadas por bandeamento G. Os níveis de mRNA dos genes CTLA-4 e VDR foram avaliados em indivíduos SD (n=42) e controles saudáveis (n=15) por meio de expressão gênica relativa, usando sondas fluorogênicas Taqman® baseadas em qPCR, e os genes endógenos EF1A e HPRT1 foram avaliados pelo método SyBR Green. A análise citogenética mostrou que, dos 54 indivíduos com SD, 90,7% apresentaram trissomia livre do cromossomo 21, 5,6% mosaicismo cromossômico e 3,7% translocação Robertsoniana. Em relação à expressão gênica, encontramos uma regulação positiva do CTLA-4 (1,13 vezes) e do VDR (2,19 vezes) nos indivíduos SD. Porém apenas o VDR foi diferencialmente expresso na SD comparado aos controles (p<0.0001). No entanto, esse resultado é insuficiente para compreender se essa expressão diferencial pode ser relacionada ao contexto imune/inflamatório dos indivíduos SD uma vez que não foi possível avaliar os achados clínicos desses indivíduos. Dessa forma, será necessária uma comparação entre os grupos em relação à presença de doenças autoimunes e inflamatórias crônicas.

A síndrome de Turner (ST) é uma das cromossomopatias mais frequentes em humanos, acometendo cerca de 1:2500 nascimentos do sexo feminino. Essas pacientes apresentam um risco duas vezes mais elevado de desenvolver doenças autoimunes e desordens inflamatórias comparadas às mulheres em geral. Vários genes que estão envolvidos com o contexto imune e inflamatório vêm sendo avaliados e relatados quanto ao risco às desordens inflamatórias e imunes na ST. Contudo, não há relatos sobre a possível associação de alterações no perfil de ativação do inflamassoma nesta sindrome. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi determinar se polimorfismos nos genes rs16944 IL-1β e rs10754558 e rs4925659 NLRP3, bem como se o perfil de expressão destes genes conferem susceptibilidade às desordens inflamatórias na ST, comparando ao grupo controle.
Este estudo compreendeu 92 pacientes com ST (caso) com ou sem história de doenças inflamatórias e 146 mulheres saudáveis (controle). A análise dos polimorfismos foi realizada utilizando o sistema Taqman e os dados foram analisados pelo programa SNPStats, com nível de significância de 0,05. Associações estatisticamente significantes foram observadas no alelo G de rs16944 (A>G) (p=0.001, OR=1.83) e genótipo GG (p=0.002, OR=3.09) no grupo caso comparado ao controle. Em contraste, não foram observadas diferenças na distribuição de rs10754558 (G>C) entre caso e controle (p=1.0 e p=0.6). Não detectamos o genótipo homozigoto AA de rs4925659 (G>A) em TS, e o alelo G e o genótipo GG foram significativamente mais frequentes em controles do que em TS (p=0.02, OR=0.61), embora nossa população para este polimorfismo não esteja no equilíbrio de Hardy-Weinberg. Nossos resultados sugerem uma possível associação do polimorfismo IL-1β rs16944 e o risco de desordens inflamatórias em pacientes com ST.

A COVID-19 apresenta manifestações clínicas que vão desde a ausência de sintomas até complicações graves. Diferentes desfechos podem estar relacionados a fatores como: idade, sexo, morbidades e variabilidade genética viral e do hospedeiro. Polimorfismos em genes envolvidos em coagulopatias têm sido associados a resultados graves de COVID-19. Investigamos a distribuição alélica e genotípica de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos genes ACE2 (rs228566), MTHFR (rs1801133) e ANXA2 (rs7163836 e rs7170178) e sua possível relação com a gravidade da COVID-19. Foram coletadas 312 amostras de swab nasofaríngeo de indivíduos com COVID-19 e o DNA genômico extraído. Os indivíduos foram estratificados em COVID-19 leve, grave e fatal. A genotipagem foi realizada por qPCR, usando sondas alelo-específicas. Nos casos leves, febre e tosse foram os sintomas mais frequentes (>76% em ambos). Nos casos graves, tosse (89,1%), baixa saturação (82,6%) e dispneia (78,3%) foram mais comuns. Nos casos fatais, os sintomas mais comuns foram dispneia (85,7%), baixa saturação de oxigênio e tosse (ambos 75,7%). Doenças cardiovasculares (29,3% e 15,7% respectivamente) e diabetes mellitus (25% e 14,3% respectivamente) foram as morbidades mais frequentes entre graves e fatais. Apenas o polimorfismo rs7170178 em ANXA2 foi associado. O genótipo AG foi significativamente mais frequente entre os casos fatais, sugerindo maior suscetibilidade à mortalidade da doença. Novos estudos envolvendo outras variantes do ANXA2 devem ser realizados para confirmar o papel desse gene nos diferentes desfechos clínicos da COVID-19.

A síndrome de Down (SD) é a cromossopatia mais prevalente em recém-nascidos, com incidência de 1:700 nascidos vivos. Além das características fenotípicas características da SD, como hipotonia, prega palmar única e olhos amendoados, há muitos fenótipos associados a essa síndrome que têm penetrância e gravidade variáveis. Os indivíduos com SD também podem apresentar uma aceleração do processo de envelhecimento, afetando particularmente o sistema nervoso central e imunológico estando associada à múltiplas alterações imunológicas, como Tireoidite de Hashimoto, diabetes tipo 1, alopecia, doença celíaca, artrite idiopática juvenil e vitiligo, que ocorrem em números desproporcionais entre indivíduos com SD em comparação com indivíduos saudáveis. Os inflamassomas desempenham um papel importante e vital na ativação e liberação de citocinas pró-inflamatórias e são altamente expressos em células imunes. Estes complexos são responsáveis por regular a resposta imunológica a fatores exógenos e endógenos. Os receptores NLRP1 e NLRP3, pertencentes à família NLR, vêm sendo apontados como principais integrantes do inflamassoma. Ambos interagem com proteínas pró-Caspases 1, como a ASC, que ativam o recrutamento das proteínas caspases estimulando o processamento das citosinas pró inflamatórias IL1-B e IL-18. O ritmo acelerado da pesquisa do inflamassoma demonstrou papéis importantes para sua ativação em muitas doenças, tanto autoinflamatórias quanto autoimunes, porém, ainda não existem estudos sobre seu papel em indivíduos com SD. O presente estudo avaliou o perfil de expressão dos genes NLRP1, NLRP3 e IL-1β com a susceptibilidade ao desenvolvimento de doenças autoimunes / inflamatórias em indivíduos com SD. Um total de 54 indivíduos tiveram o cariótipo definido, dos quais 49 apresentaram a trissomia livre (90,7%), três mosaicismo cromossômico (5,5%) e dois translocação Robertsoniana (3,7%). Para o ensaio de expressão gênica foram analisados 42 indivíduos com SD e 15 indivíduos saudáveis (grupo controle), com a média de idade de 5,1 anos e 10,5 anos, respectivamente. Comparando os níveis de mRNA do grupo de SD com o grupo controle encontramos uma regulação negativa de 10,966 vezes do gene NLRP1 (p=0,0001); 2,349 vezes do gene NLRP3 (p=0,0001), e 1,166 vezes do gene IL-1β (p=0,101). Devido à ausência dos achados clínicos, não foi possível relacionar se essa regulação negativa está associada à susceptibilidade ao desenvolvimento de doenças autoimunes / inflamatórias em indivíduos com SD.

O rápido agravamento da pandemia da COVID-19 impulsionou o uso de plataformas vacinais de fácil edição. Nesse cenário, é interessante investir em vacinas multiepítopos que exploram todos os grupos de proteínas do vírus e a sua conservação para as variantes emergentes. O presente trabalho objetivou construir antígenos sintéticos multiepítopos de proteínas do SARS-CoV-2, como plataformas utilizadas para construção de vacina de DNA a partir de duas abordagens: epítopos descritos na literatura (I) e epítopos preditos a partir da sequência de referência (II). A abordagem I utilizou epítopos das proteínas S e N, adjuvantes e linkers disponíveis na literatura que foram clonados in silico e verificados os valores de imunogenicidade, conservação e cobertura populacional dos múltiplos epítopos. A construção conteve 15 epítopos, 3 adjuvantes e 5 linkers, tendo os epítopos em sua maioria conservados, com valores de imunogenicidade positivos e o conjunto obteve 90% de cobertura populacional. A abordagem II se baseou na sequência de referência para predizer e analisar epítopos das proteínas estruturais, nsP1, acessórias para identificar aqueles 100% conservados e com os maiores valores de cobertura populacional de cada proteína para compor a segunda construção. Foram preditos entre 420 e 36 epítopos para cada uma das proteínas supracitadas. Após as análises, 38 epítopos compuseram a 2° construção que teve 70% de cobertura
mundial. Logo, o presente trabalho conseguiu construir antígenos sintéticos que para serem validados como vacina contra COVID-19.

A resposta estringe é uma via regulatória caracterizada pela produção da molécula sinalizadora (p)ppGpp, o alarmônio que tem efeito pleiotrópico na resposta a estresse. No entanto, sua função em bactérias lácticas ainda não está bem estabelecida. Liquorilactobacillus vini, é um contaminante da produção de etanol no nordeste brasileiro e modelo de resposta a estresse pelo nosso grupo de pesquisa. Deste modo, o objetivo deste estudo foi determinar o efeito de uma resposta estringente defectiva na linhagem JP 7.8.9 de L. vini em resposta a diferentes formas de estresse. O meio MRS foi utilizado nos cultivos e nos testes de tolerância a diferentes formas de estresse na temperatura padrão de 37°C. Nos cultivos da linhagem mutante foi acrescido a droga azitromicina na concentração final de 5 μg/mL. Foram determinados parâmetros de tolerância a diferentes formas de estresse através da determinação da concentração inibitória mínima (MIC), concentração bactericida mínima (MBC), curvas de crescimento em concentração sub-MIC e indução de tolerância cruzada. Além da estabilidade da parede celular através de curvas de lise. Os agentes estressores estudados foram ácido láctico, ácido acético, pH ácido, ajustado com ácido clorídrico, etanol e cloreto de sódio. A linhagem mutante apresentou um perfil de resposta estresse específico apresentando variações na MIC e MBC a diferentes formas de estresse. Padrão similar de resposta foi observado nos ensaios de tolerância cruzada. O ensaio de lise indicou que parede celular da linhagem mutante é mais frágil do que na linhagem parental Esses dados indicam que o gene relA em L. vini tem um papel central na fisiologia indo além do esperado para um gene de resposta a estresse. 

A Síndrome Metabólica (SM) é um conjunto de manifestações clínicas cardio-metabólicas que contribuem diretamente para o risco de outras doenças crônicas, como Diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e doenças cardiovasculares (DCVs). O sistema renina-angiotensina (RAS) é o principal mecanismo de regulação da pressão arterial, mas a atividade excessiva da enzima conversora de angiotensina (ACE), principal componente do RAS, pode ocasionar inflamação crônica, ativando citocinas pró-inflamatórias como IL-1β, IL-6 e TNF-α, sendo consideradas biomarcadores na fisiopatologia da SM. Sendo assim, o objetivo desse estudo é avaliar a expressão gênica do ACE e biomarcadores inflamatórios em pacientes com SM. O presente estudo avaliou a expressão relativa dos genes ACE e IL-6 em amostras de sangue total periférico de 17 indivíduos com SM, comparando a 15 controles saudáveis por meio da equação 2-ΔΔCq. Para a análise estatística foram realizados os testes de Shapiro-Wilk e Teste T Student. Observamos um aumento da expressão dos gene ACE em 2,53 vezes (p = 2,997x10-6) e IL-6 em 1,25 vezes (p = 0,9362) no grupo de pacientes em relação aos controles. Na análise estratificada das condições clínicas, encontramos aumento na expressão do ACE de 1,20 vezes (p = 0,1514) em pacientes obesos comparando aos indivíduos com sobrepeso. Foi observada ainda a diminuição da expressão deste gene de 1,10 vezes (p = 0,7834) e 1,28 vezes (p = 0,5899) na presença das características clínicas DM2 e dislipidemia, respectivamente. Quanto à expressão gênica da IL-6, observou-se aumento dos níveis de mRNA de 2,07 vezes (p = 0,1179) nos indivíduos obesos, enquanto nas características clínicas de DM2 e dislipidemia, houve a diminuição dos níveis de mRNA em 3,57 vezes (p = 0,3501) e 5,55 vezes (p = 0,003), respectivamente. Os resultados demonstram que a ACE e a IL-6, desempenham importantes atividades na fisiopatologia da SM, mas ao observamos as características clínicas estratificadas, estes genes estão intimamente relacionados com a obesidade. Desta forma, sugere-se que o aumento da expressão do ACE está relacionado à desregulação do RAS, e a expressão da IL-6 está envolvida ao desencadeamento da resposta inflamatória, nos indivíduos com SM.

A síndrome de Turner (ST) é um dos distúrbios cromossômicos humanos mais comuns, definida citogeneticamente pela perda total ou parcial de um dos cromossomos sexuais, com uma incidência de 1:2500 nascimentos de indivíduos femininos vivos. Pacientes com ST apresentam um risco aumentado de desenvolver doenças autoimunes e inflamatórias crônicas comparadas às mulheres no geral, característica apontada como uma das mais proeminentes da síndrome. Genes relacionados com os processos de regulação da resposta imune têm sido recentemente estudados na ST, incluindo CTLA-4, fundamental na atividade imunossupressora. O objetivo deste estudo foi investigar se há distribuição alélica e genotípica diferencial do SNP rs3087243 (G>A) do gene CTLA-4 na amostra de pacientes com ST. A análise do polimorfismo rs3087243 foi realizada em 112 pacientes ST, avaliando o SNP dentro do grupo de pacientes ST com doenças autoimunes e inflamatórias crônicas (grupo caso) e pacientes ST sem tais condições (grupo controle). Os ensaios de genotipagem foram realizados usando o sistema Taqman e os dados foram analisados no programa SNPStats, com nível de significância de 0.05. Os resultados indicam que apesar de uma distribuição alélica diferencial na análise de doenças autoimunes, o polimorfismo rs3087243 do gene CTLA-4 não está envolvido no contexto imune desta amostra de ST. Outros fatores podem alterar a função do gene, indicando que a investigação aqui realizada corrobora a necessidade da análise de outros genes para um melhor entendimento dos mecanismos relacionados ao desenvolvimento de doenças autoimunes e inflamatórias crônicas na ST.

Atualmente, a estratificação de risco para leucemia mieloide aguda (LMA) proposta pelo grupo European LeukemiaNet (ELN) é a mais aplicada na prática clínica, mas alguns autores defendem seu refinamento. Esse estudo se propõe a desenvolver um índice prognóstico baseado no impacto aditivo de genes no desfecho clínico de pacientes adultos com LMA. Para o desenho do índice, utilizou-se a coorte pública The Cancer Genome Atlas (TCGA) e, para validação, uma coorte externa disponível publicamente (GEO: GSE6891) e uma coorte interna de pacientes tratados em hospitais brasileiros. A classificação ELN2010 foi útil para predizer desfecho clínico nos pacientes brasileiros, embora com frequências de sobrevida inferiores as de países desenvolvidos. Em seguida, propôs-se um índice (IP) a partir da análise de mutações no gene TP53 e hiperexpressão de ID1, entretanto ele não se mostrou uma ferramenta robusta para a estratificação de risco da LMA. A hiperexpressão de ID1 foi um preditor negativo para a sobrevida global (SG) nas coortes TCGA e GSE6891, entretanto não apresentou impacto clínico na coorte Pernambucana. Propôs-se, então um índice prognóstico baseado em transcriptoma (IPT), com três grupos de risco, a partir do impacto aditivo da expressão dos genes PDE7B, IGF2BP3 e ST6GALNAC4. O IPT foi um fator prognóstico independente para a SG, sobrevida livre de doença e de eventos de pacientes com LMA e foi capaz de refinar a classificação ELN2010 e foi validado na coorte externa.

A deficiência na recuperação imunológica de indivíduos soropositivos submetidos à terapia antirretroviral apresenta-se num contexto multifatorial, em que um dos principais aspectos está ligado à destruição exacerbada de células T CD4+ por ativação de caspase-1. O objetivo do trabalho foi avaliar se fatores do hospedeiro ligados à morte celular por piroptose podem influenciar na recuperação imune da população avaliada. Foi analisado o perfil imunofenotípico em relação aos níveis de células T CD4+ recém-emigradas do timo (RTE) em piroptose por citometria de fluxo, evidenciando a influência do sexo como fator associado à não recuperação imune. Variantes dos genes da via da piroptose IL18 (rs187238), IL1B (rs1143634), NLRP3 (10754558), CARD8 (2043211) e IFI16 (rs6940) foram avaliadas por sondas TaqMan alelo-específicas. Realizou-se uma análise genótipo-guiada com o gene IL18, considerando o mesmo aspecto imunofenotípico anterior. O sexo masculino apresentou um maior nível de células T CD4+ RTE em comparação ao sexo feminino (P=0.035). O polimorfismo C>G no gene IL18 demonstrou uma menor susceptibilidade à não resposta imunológica tanto o alelo G (P=0.10) quanto o genótipo GG (P=0.022). Foi demonstrada a associação entre o polimorfismo rs187238 com os níveis de morte celular por caspase-1 (P=0.020). Observou-se que indivíduos com o genótipo GG possuem menores níveis de células T CD4+ RTE piroptóticas em comparação com o ancestral homozigoto CC (P=0.029) e o heterozigoto CG (P=0.018). Os dados encontrados neste estudo fornecem subsídios para uma melhor compreensão dos aspectos envolvidos com a morte celular em indivíduos HIV positivos não respondedores imunológicos.

Doenças respiratórias infecciosas estão entre as três principais causas de morte no mundo, com destaque para tuberculose (TB) e COVID-19. Ambas, embora apresentem diferentes patógenos, Mycobacterium tuberculosis (Mtb) e SARS-CoV-2, respectivamente, são consideradas graves e epidêmicas. As suas taxas de infecção são semelhantes entre homens e mulheres, entretanto o número de complicações e óbitos decorrentes das duas infecções é maior em homens quando comparado às mulheres em idade fértil. Hormônios esteroides 17β- estradiol (E2) e vitamina D3 (VD3) podem desempenhar importantes papéis imunomoduladores surgindo como moléculas coadjuvantes no tratamento dessas doenças. Desta forma, o objetivo deste trabalho é avaliar como como esses hormônios influenciam na resposta imune frente à inflamação causada por esses patógenos em modelos ex vivo e in vitro. Como resultados parciais, identificamos associação entre os SNPs VDR rs4760648 e rs2228570 e a susceptibilidade diferencial à TB. O mRNA do VDR apresentou expressão de -10,717 vezes, p=8,42x10-12 em pacientes com TB. Elencamos em uma revisão o possível papel do E2 na resposta imune ao SARS-CoV-2, uma vez que esse hormônio modula a resposta imune e regula uma reação inflamatória mais eficaz na COVID- 9. Verificamos que VD3 e E2, em cultura celular de PBMC, exercem papeis diretos na inflamação em resposta ao Mtb modulando a expressão de diversos genes da resposta imune. Assim, possibilitamos identificar vias pelas quais esses hormônios atuam na modulação da inflamação nessas patologias.

O feijão-caupi é uma cultura de importância socioeconômica que, apesar de ser  considerada tolerante à estresses abióticos, apresenta redução de produtividade mediante tais situações. Em condições de estresse, as plantas desencadeiam uma reprogramação transcriptômica para suportar condições desfavoráveis. As proteínas 14-3-3s são moléculas conservadas e multifuncionais que estão envolvidas em diversos processos desde à germinação de sementes até a resposta às condições desfavoráveis. Este estudo buscou identificar e caracterizar, a nível estrutural e funcional, a família gênica 14-3-3 do feijão-caupi. Para isto, transcritos 14-3-3s foram identificados a partir de sondas, desta e de outras cinco leguminosas. As sequências foram traduzidas e analisadas in silico quanto à estrutura, localização, conservação e características químicas. Foram identificadas nove isoformas com estrutura conservada e pequenas variações nas regiões N e C terminais. As 14-3-3s subdividem-se nos grupos Epsilon e não Epsilon com base na estrutura de organização éxon-ínton. Ortólogos foram encontrados em todas as leguminosas analisadas comparativamente. Bibliotecas HT-SuperSAGE e RNASeq foram utilizadas para analisar o perfil de expressão in silico das 14-3-3s, sob estímulo de desidratação radicular e salinidade. Os transcritos Vu14-3-3 apresentam respostas variadas, todavia, Vu14-3-3d e Vu14-3-3a foram upregulated para o acesso tolerante e down-regulated para o acesso sensível, mediante desidratação radicular, o que indica que estes podem ser alvos promissores à serem explorados no melhoramento genético da espécie.

Anemia de Fanconi é uma doença rara, autossômica recessiva caracterizada por fragilidadade cromossômica decorrente de defeito no sistema de reparo do DNA. A clínica da doença é heterogênea variando de pacientes assintomáticos até fenotipos mais graves que envolvem alterações na pele, baixa estatura, alterações esqueleticas e falência medular. O diagnóstico é realizado a partir do teste de fragilidade cromossômica usando agentes alquilantes como  mitomicina C e diepoxibutano ou estudo por mutação nos genes FANCS.  No Brasil não existem dados epidemiológicos a respeito da doença e poucos centros realizam o teste diagnóstico de fragilidade cromossômica, sendo ausente centros na região Nordeste. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi descrever os aspectos biomoleculares dos pacientes pediátricos com AF do estado de Pernambuco. No periodo de 2018 a 2020, 75 pacientes suspeitos para  AF foram analisados, tendo 15 pacientes com diagnóstico confirmado através do teste de Mitomicina C. Dentre os pacientes AF+ foi observado uma pequena prevalência no sexo feminino (55%), presença de manchas café com leite (60%) e anormalidades esqueleticas (53%).  Cinco pacientes AF+ realizaram a citogenética da medula óssea, onde quatro apresentaram cariótipo normal e um apresentou trissomia do cromossomo 21. A partir dos dados obtidos, foi possivel traçar um perfil clínico e biomolecular dos pacientes do estado de Pernambuco, favorecendo com os dados epidemiológicos para a região Nordeste. A anemia de Fanconi é uma doença subdiagnósticada no Brasil  e a implantação do teste diagnóstico em PE, proporcionou um diagnóstico mais precoce, e consequentemente um melhor acompanhamento aos pacientes, garantindo um melhor tratamento e qualidade de vida para os pacientes AF.

Atualmente, alterações cromossômicas estruturais juntamente com mutações somáticas adquiridas são frequentemente identificadas em pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA), sendo utilizadas para definir subgrupos distintos de pacientes quanto ao seu prognóstico. Apesar de sua evidente importância, a contribuição de fatores hereditários sempre foi subestimada na patogênese e evolução clonal da LMA. Dentre as diferentes variantes genéticas que são descritas como relevantes no câncer, merece destaque o polimorfismo presente no gene TP53 Arg72Pro (G215C), particularmente por sua frequência e seu papel como um modulador da atividade
proteica. O presente trabalho tem como objetivo avaliar o papel funcional do polimorfismo TP53 Arg72Pro em linhagem celular de LMA. Primeiro foram construídos vetores lentivirais contendo as variantes polimórficas TP53-Arg e TP53- Pro72. Em seguida, estes vetores foram utilizados para infectar as células leucêmicas da linhagem THP-1(células knockdown para o gene TP53; TP53 -/-). Após a transfecção lentiviral e subsequente seleção das células infectadas, estas células foram utilizadas em ensaios de proliferação celular e apoptose. Foi observado que as células que continham a variante TP53-Pro72 apresentaram menor taxa de proliferação celular, enquanto que as células contendo a variante TP53-Arg72 foram mais sensíveis a apoptose induzida por citarabina, um quimioterápico frequentemente utilizado da prática clínica. Dessa forma, é possível que o polimorfismo TP53 Arg72Pro module a atividade da proteína p53 na LMA, podendo servir como um possível alvo terapêutico na doença.

Dentro das ciências agrárias, identificar alelos relacionados a produção em condições de seca é imprescindível para suprir a demanda futura por alimentos. Entretanto, a natureza complexa e quantitativa de seus loci controladores (QTLs) limitam a manipulação por programas de melhoramento.Dissecar um QTL a nível
de genes individuais (QTGs) possibilita aplicação desses na desejada Seleção Assistida por Marcadores (SAM). Porém, a tarefa muitas vezes é desafiadora. O feijão-caupi (Vigna unguiculata) é uma cultura que vem emergindo como modelo em estudos acerca da resposta ao estresse de seca devido a sua resiliência
natural e genoma pequeno. O presente trabalho propiciou a identificação de genes candidatos (GCs) responsivos ao estresse em questão Para isso, unitags HT-SuperSAGE geradas a partir de genótipos contrastantes (tolerante e sensível) da espécie, expostos a desidratação radicular (até 150 minutos) e mantidos sob cultivo hidropônico normal (controle negativo), permitiram identificar transcritos associados (BLASTn). Após contagem das tags relativas a cada transcrito, aqueles co-expressos entre os genótipos e mapeados in silico em loci fortemente
ligados no cromossomo foram selecionados como candidatos. Dos 58 conjuntos alvos, três blocos de loci sequenciais, com componentes para: Chalcone synthase (24kpb), Pathogenesis related (30kpb) e um de composição variada (38kpb) estiveram diretamente relacionados com estresse de seca segundo a literatura.
Esses genes, após devidas validações das expressões (via RT-qPCR), poderão ser úteis em programas de melhoramento de feijão-caupi, bem como de outras leguminosas.

A leucemia promielocítica aguda (LPA) é um subtipo distinto de leucemia mielóide aguda (LMA) em aspectos clínicos, morfológicos e genéticos. Sua fisiopatologia encontra-se intimamente ligada a proteína de fusão PML-RARA resultante da translocação recíproca t(15;17) levando ao bloqueio na diferenciação e celular. A doença possui tratamento específico utilizando ácido all-trans retinóico (ATRA) em associação com trióxido de arsênico (ATO) que resulta na degradação da proteína PML/RARA, conduzindo à diferenciação terminal com subsequente apoptose das células leucêmicas. Embora a utilização dessas drogas leve a altas taxas de remissão, as taxas de mortalidade precoce e recaída ainda são consideradas altas. Dessa forma, marcadores moleculares prognósticos figuram com extrema importância para a predição de risco. Neste contexto, a expressão gênica do BAALC
(Brain and acute leucemia) foi associado com um pior desfecho clínico. Apesar de ter seu impacto prognóstico esclarecido, ainda se sabe pouco sobre seu papel funcional. Neste estudo, utilizamos as linhagens NB4 e NB4-R2 como alvos de vetores lentivirais para expressar o BAALC e avaliar os processos celulares de proliferação, apoptose e diferenciação celular. Aqui nós mostramos que a hiperexpressão do gene BAALC em linhagens celulares de LPA levou a uma taxa significativamente menor de diferenciação (47%) em 96 horas comparadas a célula controle (88%) (P=0,009). Além disso, aumentou a taxa de proliferação celular tanto em NB4 (MFI ki-67: 48%) quanto em NB4-R2 (MFI ki-67: 81%) frente ao controle. A IC50 foi significativamente menor nas células controle quando tratadas com a associação ATRA concentração fixa (1uM)/ATO (IC50 NB4-pMEG 2,38uM ATO; NB4-BAALC 4,uM ATO). Dessa forma a expressão induzida do BAALC nas linhagens estudadas está associada a um aumento na proliferação e diminuição da diferenciação e parece ter papel na apoptose quando administrado a combinação ATRA/ATO. Porém mais ensaios precisam ser realizados para descrever melhor qual o mecanismo utilizado pela BAALC para impactar nesses processos celulares.

A anemia falciforme (AF) é uma doença que, embora monogênica, é marcada por intensa heterogeneidade fenotípica. Em virtude disso, diversos estudos buscando moduladores genéticos são realizados em todo o mundo. Um dos potenciais moduladores da doença é o gene KLOTHO (KL) que tem funções descritas na biologia do óxido nítrico e expressão de moléculas de adesão. Assim, objetivamos analisar a associação dos polimorfismos rs211239, rs685417, rs1207568 e rs9536314 localizados em KL com as principais complicações da AF: acidente vascular cerebral (AVC), osteonecrose, úlceras de perna, priapismo, síndrome torácica aguda, crises vaso-oclusivas (CVOs) e cardiopatia. Além disso, também foi feita a dosagem da proteína KL solúvel para avaliar diferenças na sua expressão em diferentes grupos. Foram incluídos na pesquisa 689 pacientes acompanhados na fundação HEMOPE. O polimorfismo rs211239 mostrou-se associado com CVOs; rs685417, com AVC, priapismo, número de complicações e com uma menor incidência de priapismo em um menor intervalo de tempo (P < 0,05). Os polimorfismos rs1207568 e rs9536314, por sua vez, não mostraram associação com as complicações analisadas (P > 0,05). A expressão da proteína mostrou-se aumentada em indivíduos com osteonecrose e naqueles com o genótipo selvagem (GG) para o polimorfismo rs1207568 (P < 0,05). Diante disso, percebe-se que KL pode ser um importante modulador da doença, sendo interessante que mais estudos sejam desenvolvidos em diferentes coortes de indivíduos com AF para ampliar as investigações.

A Artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune que pode ser desencadeada por fatores genéticos, epigenéticos e ambientais. Muitas células que fazem parte do sistema imune contribuem para a inflamação da AR, principalmente células relacionadas ao sistema imune adaptativo. No entanto, quando se trata de
células do sistema imune inato poucos estudos têm sido realizados, principalmente em monócitos. No processo da resposta inflamatória diversas cascatas gênicas podem estar envolvidas, e dentre elas, a via do NFkB apresenta-se como umas das vias cruciais, sendo que desregulações nessa cascata de sinalização podem
exacerbar a inflamação e ser um fator de risco para a patogênese da AR. A via de ativação do NFκB necessita de moléculas adaptadoras como TRAF6, que gera a ativação das subunidades do complexo NFκB. Desregulações na expressão do TRAF6 e NFKB1 são importantes no desencadeamento do processo inflamatório e consequentemente na AR. Sendo assim, o objetivo do nosso estudo foi verificar a expressão destes genes e as alterações epigenéticas que podem estar relacionadas a eles em monócitos de pacientes com AR. Para tanto, foi realizada a predição e seleção de miRNAs com alvos no TRAF6 (miR-124-3p e miR-194-5p) e NFKB1 (miR-9-5p e miR-340-5p), bem como o isolamento de monócitos de 19 pacientes com AR e 18 controles. Nossos dados mostraram que o miR-124-3p regula negativamente o TRAF6 (r=-0.349; p=0.0371), enquanto que o miR-194-5p regula positivamente o gene (r=0.6363; p=0.00003). Ainda, foi observado que ambos miRNAs regulam positivamente o NFKB1 (miR-9-5p: r=0.75 p<0.001; e miR-340-5p: r=0.79; p<0.001). Não foram obervadas diferenças na expressão dos genes e miRNAs em monócitos entre pacientes com AR e controles. Em relação aos
parâmetros clínicos, apenas o miR-340-5p mostrou uma diferença significativa em relação ao índice de atividade da doença CDAI (r=-0.51; p=0.024), indicando que sua expressão em monócitos pode estar relacionada a patogênese da AR.

As crises vaso-oclusivas (CVO) são a principal causa de morbidade nos portadores de anemia falciforme. A produção desbalanceada de citocinas contribui com o progresso da vaso-oclusão, sendo sua caracterização importante para melhor compreensão da fisiopatologia da doença. Desse modo, este trabalho visa descrever o perfil de expressão gênica e proteica das citocinas IL- 1β, IL-6, IL-8 e TNF-α pelos granulócitos polimorfonucleares (PMN) e células mononucleares (CM) nos pacientes durante e após crise vaso-oclusiva. Foram analisados 46 pacientes com anemia falciforme, divididos em controles estáveis e caso, subdivididos em pacientes em crise e pós crise. Foi realizada separação de CM e PMN pela técnica de Ficoll-Hypaque para posterior extração do mRNA, seguida da síntese do cDNA para realização de qPCR pelo sistema TaqMan®. As dosagens séricas foram realizadas pela técnica de ELISA. Os resultados mostraram que apenas os PMN, em ambos os pacientes em crise e pós-crise, apresentaram maior expressão das quatro citocinas quando comparados ao grupo controle (0,0001 ≤ p ≤ 0,0381). Além disso, quando os mesmos pacientes em crise e pós crise foram comparados entre si, somente a IL-6 apresentou-se mais elevada após a crise (p=0,0175) para os PMN, demonstrando que estes são os principais moduladores das CVOs, com alta expressão de IL-6. Somente a IL-8 apresentou dosagem compatível com os limites do kit, estando consideravelmente elevada na crise em comparação com os pacientes controle (P=0,0009).