A fim de se obter uma melhor estratificação de risco, o impacto de alterações moleculares tem sido amplamente estudado em pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA). Além de alterações estruturais e mutações no DNA, expressão aberrante de genes podem influenciar o curso clínico da doença. Nesse contexto, os membros da família PARP (do inglês, Poly(ADP-ribose) polymerases) (PARP1, PARP2 e PARP3), responsáveis por codificar proteínas capazes de exercer modificações pós-traducionais relacionadas a diversos processos celulares, foram descrito como importantes preditores de prognóstico em pacientes com tumores sólidos, embora pouco se saiba do seu impacto clínico na LMA. Este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão dos genes PARP1, PARP2 e PARP3 e seu impacto nos desfechos clínicos de paciente adultos com LMA. Ao todo, 3 coortes independentes foram analisadas (Recife: 81 pacientes, TCGA: 173 pacientes e GSE6891: 245). Na coorte de TCGA e GSE, a expressão de PARP2 e PARP3 foi maior em pacientes com cariótipo complexo (p<0,001) e risco desfavorável (p<0,001). Além disso, a expressão aberrante de PARP2/3 teve impacto direto na sobrevida dos pacientes (PARP2, coortes TCGA (p=0,036) e GSE (p=0,006); PARP3, coortes TCGA (p=0,003) e GSE (p=0,001). A exemplo de tumores sólidos,
a expressão aberrante de PARP2/3 pode predizer um pior desfecho em pacientes adultos com LMA.

Tripanosomatídeos são protozoários flagelados que englobam agentes patogênicos dos gêneros Leishmania e Trypanosoma. Esses organismos exercem um controle da expressão gênica através de eventos predominantemente pós-transcricionais, muitos envolvendo o controle da estabilidade e tradução de RNAs mensageiros (mRNAs). Dentre as diferentes proteínas de ligação ao RNA (RBPs) participantes nesses eventos, a mais relevante deve ser a proteína de ligação à cauda poli-A (PABP). Três de seus homólogos foram identificados em Leishmania, todos estruturados em uma região N-terminal com quatro motivos de reconhecimento ao RNA (RRMs 1 a 4), uma região linker intermediária e um domínio MLLE presente na sua região C-terminal. O primeiro dos homólogos, a PABP1 se mostrou indispensável e fortemente ativa durante a tradução, além de uma associação com mRNAs diferentes dos associados às PABPs 2 e 3. Também foi observada uma forte afinidade da PABP1 para o complexo eIF4F baseado nas subunidades EIF4E4 e EIF4G3, com uma interação inédita identificada entre a PABP1 e o EIF4E4. Isoformas fosforiladas da PABP1 a indica como potencial alvo de processos regulatórios. Portanto, o presente estudo objetiva melhor compreender a atividade da PABP1, avaliando o papel de diferentes regiões desta proteína, incluindo sítios de possíveis interações proteína-proteína, na sua interação com outras proteínas parceiras, como a proteína de ligação a RNA denominada de RBP23. Ele dá continuidade a estudos prévios onde foram gerados mutantes em motivos julgados relevantes nos RRMs 1 e 2, na região linker e no domínio MLLE. Neste trabalho, diferentes construções mutantes nos RRMs 3 e 4 foram geradas por mutagênese sítio-dirigida e avaliadas quanto ao seu potencial de complementação após a deleção das duas cópias dos genes da PABP1 no genoma de Leishmania infantum. Como resultados preliminares, o mutante PABP1_MLN, no RRM4,levou a uma diminuição no crescimento celular, e a proteína mutada se mostrou incapaz de complementar a ausência do gene PABP1 endógeno. Para todo o conjunto de mutantes disponíveis, estes foram avaliados em ensaios de imunoprecipitação in vivo, e as amostras obtidas analisadas por espectrometria de massas, visando avaliar cada uma das regiões da proteína frente à interações novas e já estabelecidas. Esse trabalho contribuirá no entendimento acerca da especificidade da PABP1 aos seus mRNAs alvos, bem como a participação de diferentes motivos nas interações estabelecidas por esta na durante a iniciação da tradução de tripanosomatídeos.

Existe uma sub-representação do estado de Pernambuco em estudos genético-populacionais com marcadores Y-STRs, bem como no banco de dados mundial YHRD, sabidamente referência para diversas análises. Esse fato, somado à importância antropológica em apresentar detalhes da história popul acional local, justificam o presente trabalho, que objetivou caracterizar as linhagens paternas e fornecer dados de interesse forense local para uma amostra da população de Pernambuco, por meio de um conjunto de 23 marcadores microssatélites do cromossomo Y (Y-STRs). Para este fim, 172 amostras masculinas oriundas de três mesorregiões do interior do estado foram coletadas e genotipadas utilizando o sistema multiplex PowerPlex ®Y23 (Promega Corporation). Os parâmetros forenses de frequências alélicas (FA), frequências haplotípicas (FH); diversidade gênica (DG), diversidade haplotípica (DH), capacidade de discriminação (CD) e probabilidade de coincidência haplotípica (PCH) foram calculados utilizando o programa Arlequin 3.5.1.2, e a inferência dos haplogrupos foi realizada através da plataforma online Haplogroup predictor – HAPEST. Os dados obtidos para os parâmetros analisados evidenciam a eficiência do kit PowerPlex Y23 na fração da população pernambucana para fins de validação forense, revelando uma alta diversidade gênica para os loci presentes, alta capacidade de discriminar haplótipos entre indivíduos aleatórios na população e baixa probabilidade de coincidir um mesmo haplótipo para dois indivíduos não aparentados, e a inferência de haplogrupos baseada em haplótipos dos Y-STRs corroborou com a estrutura de patrilinhagens já indicada para os demais estados brasileiros, sendo condizente com a história local de ocupação humana

A videira (Vitis vinifera L.) apresenta significativa importância social e econômica no Brasil. Entretanto, sua produtividade é frequentemente afetada, devido à ocorrência de estresses. Nesse contexto, as modificações epigenéticas compreendem ampla funcionalidade, sendo os processos de metilação e demetilação do DNA participantes diretos no mecanismo de combate ao estresse biótico. Esses processos são desenvolvidos pelas enzimas metiltransferases (MTases) e demetilases (dMTases), respectiavamente. O presente trabalho objetivou caracterizar e analisar a modulação da expressão dessas enzimas no transcriptoma da videira inoculada com Xanthomonas citri pv. viticola (Xcv). Foram identificadas no transcriptoma em questão seis VvMTases e três VvdMTases, todas apresentando domínios característicos de tais grupos de enzimas. A análise fenética indicou grupos de MTases e dMTAses diversificados, correspondentes às suas respectivas subfamílias, sendo possível confirmar a classificação previamente realizada a partir da identificação dos domínios. Adicionalmente, foram
identificados no genoma da videira 12 loci codificadores de VvMTases e 3 de VvdMTases. Os promotores das VvMTases associaram-se aos fatores de transcrição AP2-EFR, Dof-type e WRKY, indicando uma ampla funcionalidade, incluindo resposta a estresse. Além disso, um alto índice de conservação dessas enzimas foi encontrado nos membros de diferentes famílias como, por exemplo, Fabaceae e Euphorbiaceae. Para o tempo de 90 minutos, os dados de transcriptômica indicaram expressão constitutiva para VvMTases e VvdMTases ao
longo de todo ensaio. Essas enzimas com expressão constitutiva devem, portanto, ser potencialmente exploradas quanto à sua participação nos mecanismos de defesa vegetal.

Dípteros necrófagos são frequentemente encontrados em locais de crime, seus espécimes, principalmente imaturos, auxiliam desde a estimativa do intervalo pósmorte a identificação de vítimas e suspeitos, em todos os casos a identificação do material biológico periciado é uma etapa crucial a qual vem contando com o auxílio da biologia molecular. Busca por marcadores moleculares robustos e metodologias sensíveis são de suma importância para corroborar na eficácia das atividades periciais. Desta forma, o presente trabalho objetivou comparar dois marcadores moleculares mitocondriais úteis para a técnica barcode em dípteros e criar um protocolo para recuperação de Short tandem repeat (STR) humano presente no conteúdo estomacal de dípteros larvais. Os dípteros foram coletados nas dependências dos Institutos de Medicina Legal da Paraíba e Pernambuco e adicionalmente foram utilizadas amostras da coleção entomológica da Universidade de Brasília. A extração do DNA ocorreu utilizando fenol-clorofórmio e Chelex 10%, em seguida foram sequenciadas as regiões COI e CytB dos dípteros, realizada buscas por sequencias homologas no NCBI através de BLASTn e uma análise de distância genética foi executada no software MEGA. O perfil humano presente no conteúdo estomacal das larvas será amplificado com o PowerPlex® Fusion System kit, analisado no GeneMapper e comparado com perfis de referência. Os resultados da identificação de dípteros mostram que a região do CytB proposta como barcode revelou-se mais robusta, apresentado valores de distância genética superiores a 150% aos do COI. Estes resultados contribuirão na eficiência da taxonomia molecular e proporcionaram celeridade nas atividades periciais.

   Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista capaz de infectar pacientes queimados ou imunocomprometidos em hospitais e ambientes de assistência à saúde. Uma das principais causas de infeções hospitalares causadas por P. aeruginosa é devido a sua resistência intrínseca aos antimicrobianos e produção de biofilme. O sistema CRISPR/Cas é definido como um mecanismo de defesa de procariotos contra elementos genéticos móveis (MGEs), composto por um loco CRISPR, formado por sequências repetitivas intercaladas por espaçadores e genes cas. O trabalho teve como objetivo uma análise de isolados de P. aeruginosa comportando o sistema CRISPR/Cas. Dos 12 isolados analisados, 83% abrigam o sistema tipo I-F e 17% o sistema tipo I-E. Apesar de existirem outros tipos de sistema CRISPR em P. aeruginosa, o tipo I-F é o mais encontrado nos isolados. Os espaçadores encontrados para o tipo I-F correspondem a sequências de bacteriófagos e plasmídeos, corroborando com o princípio de funcionamento do sistema CRISPR/Cas. Foi observado a presença de genes anti-CRISPR e profagos inseridos nos genomas desses isolados. A presença dos STs compartilhados entre setores e entre hospitais permitiu traçar uma rota de disseminação desses isolados. Entretanto, a aplicação do loco CRISPR como uma ferramenta molecular para tipagem, se mostrou ineficaz em P. aeruginosa. Nossos resultados fornecem informações sobre a genética básica estrutural do loco CRISPR, o que vem a contribuir com a geração de conhecimentos sobre o sistema CRISPR/Cas em P. aeruginosa.

O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] representa a principal leguminosa cultivada nas regiões Norte e Nordeste. No entanto, essa cultura sofre graves perdas às custas de fatores ambientais adversos, incluindo a seca. Quando as plantas enfrentam estresses ambientais, os fitohormônios atuam como transdutores de sinal,
promovendo respostas específicas às plantas. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a expressão de genes envolvidos nas vias de sinalização de fitohormônios, em V. unguiculata, após a exposição das raízes ao ar (150 min.). Para esse fim, unitags SuperSAGE (de 26 pb) de feijão-caupi, provenientes de dois acessos
diferentes em resposta à seca, foram alinhadas (via BlastN) aos transcritos de feijãocaupi associados a nove vias de sinalização de fitohormônio (auxina, citocinina giberelina, ácido abscísico, etileno, jasmonato, brassinoesteóides, ácido salicílico e estrigolactonas). Dos 625 transcritos relacionados a essas vias, 320 foram
diferencialmente expressos (DE) após o estímulo aplicado (p <0,05). No perfiltolerante (acesso Pingo de Ouro), os transcritos UR (induzidos), DR (reprimidos) e n.s., ao nível de p <0,05, foram 175, 50 e 95, respectivamente. No perfil sensível (Santo Inácio), esses números foram 132, 130 e 58, respectivamente. Paralelamente,
uma análise do enriquecimento dos fatores de transcrição (FTs) previu os FTs regulando genes que codificariam os transcritos induzidos (UR) observados nos perfis de resposta ao estímulo. Também foram identificados transcritos com regulação divergente ou convergente entre os acessos, assim como os FTs exclusivos e os
compartilhados pelos acessos. Os resultados obtidos contribuem para uma melhor compreensão das vias de sinalização do fitohormônio nas respostas de diferentes acessos de feijão caupi após um estímulo de esidratação radicular.

O câncer do colo do útero tem como o principal agente etiológico o Papilomavírus Humano - HPV, com DNA epissomal circular e pequeno, geralmente envolvidos em lesões benignas cutâneas e de mucosas. No entanto, alguns HPVs apresentam potencial carcinogênico e as lesões associadas podem evoluir para o câncer. Atualmente, estão disponíveis três vacinas profiláticas aprovadas e comercializadas, baseadas em partículas semelhantes a vírus, e embora contemplem diversos tipos virais (HPVs 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 52, 58), não são capazes de tratar tumores existentes ou que possam vir a ser desenvolvidos em pacientes infectados previamente. Por esse motivo, o presente projeto busca desenvolver estratégia terapêutica para o câncer do colo do útero a partir das vacinas de DNA codificantes para os epítopos da oncoproteína E5 do HPV 16. Alguns dos epítopos de E5, adicionados a nossa estratégia vacinal são capazes de induzir a resposta imune celular com perfil de células T citotóxicas, tão necessárias para regressão dos tumores cervicais. Envolvida na progressão, transformação celular, evasão do sistema imune e impedimento da morte por apoptose, a oncoproteína E5 também é expressa nas fases iniciais da infecção, tornando-a atrativa para terapias vacinais que visam às fases iniciais da transformação tumoral. Para tal, avaliamos in vivo a expressão dos respectivos antígenos em fêmeas
C57black, e in vitro a partir de esplenócitos dos camundongos imunizados. Analisamos a resposta imune celular adaptativa (TCD4, TCD8 e TCD16) e decitocinas (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17 e TNF-α) secretadas por camundongos previamente inoculados com células tumorais C3. Também avaliamos o estresse oxidativo e os níveis toxicológicos induzidos pelo tratamento em modelo animal. Os resultados assinalam a capacidade da construção gênica proposta em induzir regressão de tumores, além de apresentar os melhores resultados entre os grupos avaliados. Os dados sugerem a estratégia E5 multiepítopo como uma possível nova terapia vacinal para tumores induzidos pelo HPV 16.

O câncer cervical é quarta neoplasia mais prevalente em mulheres em todo o mundo. Além disso, sem considerar os tumores de pele não melanoma, o câncer cervical é o primeiro mais incidente na região Norte e o segundo nas regiões Centro-Oeste e Nordeste no Brasil. Os cânceres associados à infecção pelo papilomavírus humano (HPV) incluem desde lesões neoplásicas anogenitais até orofaríngeas. A infecção pelo HPV é principalmente contraída pelo contato sexual, através do qual, microtraumas na mucosa permitem o acesso de partículas virais ao epitélio basal. Devido à alta disseminação de infecções pelo HPV entre indivíduos sexualmente ativos, a proteção contra os cânceres associados ao HPV pela vacinação preventiva ainda é muito restrita. As atividades de proteínas virais E6 e E7 produzidas por HPV de alto risco são apontadas como as principais mediadoras da carcinogênese. O presente estudo objetiva desenvolver estratégias terapêuticas contra lesões associadas à infecção pelo HPV-16, através de elicitação de resposta imune contra epítopos imunogênicos das proteínas E6 e E7 de HPV-16, em modelo pré-clínico. A resposta imune foi incrementada através de associação com o imunomodulador Ii-Padre e sequências linkers, visando à ativação de linfócitos TCD4 e o aumento da apresentação dos antígenos pelo sistema imune, respectivamente. Para confecção da vacina de DNA, os genes de interesse (multi E6, multi E7 e Ii-PADRE) foram clonados em vetor para expressão em célula de mamífero (pVAX) em orientação BamHI/XbaI. Os clones foram confirmados através de PCR, clivagem por enzimas de restrição e sequenciamento de DNA. Além disso, os insertos foram clonados em vetor de expressão bacteriana (pAE)  em orientação BamHI/EcoRI e KpnI/ HindIII, a fim de obter  peptídeos vacinais para imunização dos animais sob regime de prime-boost heterólogo. O desenvolvimento de vacinas de DNA como estratégia terapêutica é um passo crucial para a consolidação de investigação científica, inovação e desenvolvimento tecnológico para o tratamento de doenças de difícil manejo pelos métodos tradicionais, como o câncer.

A levedura Dekkera bruxellensis tem sido frequentemente relacionada a episódios de contaminação, devido a sua capacidade de competir com Saccharomyces cerevisiae por diferentes substratos. A habilidade de D. bruxellensis em assimilar fontes de carbono não utilizadas por S. cerevisiae é um dos fatores associados à
sua alta adaptação nos ambientes industriais. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os aspectos fisiológicos e genéticos do metabolismo de açúcares utilizados como substratos para a produção de bioetanol por D. bruxellensis. Para isso, foi realizada uma triagem para a metabolização de açúcares industrialmente
relevantes com diferentes isolados de vinho e etanol. Adicionalmente, foi estudada a capacidade de algumas linhagens em fermentar xilose e arabinose, bem como a influência da glicose no metabolismo dessas pentoses e consequente produção de etanol. Isolados de vinho apresentaram maiores taxas de crescimento em galactose
e os de etanol em celobiose e lactose. Além disso, isolados de etanol foram menos sensíveis a repressão por glicose. Em anaerobiose estrita, os isolados obtiveram altas taxas de crescimento em diferentes açúcares, sem necessidade de suplementação do meio. Os resultados mostram a alta diversidade fenotípica dentro desse grupo quanto a utilização de açúcares. Nos ensaios com xilose e arabinose em aerobiose, essas pentoses foram convertidas preferencialmente a biomassa. Em limitação de oxigênio, o consumo de xilose foi lento com baixa
produção de etanol, ao passo que a arabinose não foi utilizada. Entretanto, a presença de glicose no meio favoreceu o consumo de xilose nessa condição. Nossos resultados sugerem que a glicose pode fornecer intermediários que auxiliam no metabolismo de xilose. Além disso, os dados relevam que o oxigênio é um fator chave no metabolismo de pentoses em D. bruxellensis.

A Terapia Antirretroviral objetiva diminuir a carga viral plasmática e, consequentemente, reconstituir as células T CD4+. Entretanto, entre 15 a 30% dos indivíduos que atingem o sucesso virológico, não se recuperam imunologicamente, condição chamada falha imunológica. Alguns fatores são investigados como causa, dentre eles, a baixa produção de linfócitos T CD4+, processo esse influenciado pela atividade de citocinas, como a IL-10. Alterações na expressão e nos níveis plasmáticos da IL-10 podem estar relacionados à ineficiência da recuperação imunológica. Nesse contexto, a presença de polimorfismos na região promotora do gene IL10, pode influenciar nesse processo. Sendo assim, o estudo objetivou avaliar a influência da IL-10 na falha imunológica de indivíduos vivendo com HIV-1 em TARV. A dosagem sérica da IL-10 foi realizada por citometria (CBA), enquanto a genotipagem dos SNPs ocorreu através de sondas Taqman por PCR em Tempo Real. Foi realizado também o ensaio de quantificação relativa da expressão do gene IL10 por meio do Ct comparativo. Como gene de referência utilizou-se o GAPDH. Com relação à dosagem sérica, não houve diferença significativa entre os grupos IR e INR. O mesmo foi encontrado na genotipagem, onde os genótipos mostraram não interferir nos níveis plasmáticos da IL-10. Já no ensaio de expressão, observouse que o gene IL10 está 3,77 vezes mais expresso no grupo INR comparado ao
IR. Sendo assim, mais avaliações são necessárias para compreensão do processo da falha imunológica