A nefrite lúpica (NL) é uma glomerulopatia comum nos pacientes com Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES), que pode evoluir para Doença Renal Crônica (DRC). A patogênese da NL é mediada pela desregulação do sistema imune inato e adaptativo, e o seu tratamento terapêutico é realizado pelo uso de imunossupressores. Mediante a necessidade de biomarcadores que predizem a resposta terapêutica, esse estudo buscou avaliar a expressão dos genes TLR7, IRAK1, IRF5 e NLRP12 em pacientes com NL em tratamento imunossupressor. Para isso, foi realizado um estudo prospectivo com 12 meses de acompanhamento, no qual os pacientes foram classificados em 2 grupos: com resposta renal de eficácia primária (CRREP) e sem resposta renal de eficácia primária (SRREP). As análises de expressões gênicas em RNAs mensageiros do sangue dos pacientes foram analisadas por RT-qPCR nos momentos inicial, 6 meses e 12 meses. A expressão do gene IRAK1 foi significativamente maior no T12 ao longo do acompanhamento tanto no grupo CRREP (FC = 3,82; p =0,0166) quanto no SRREP (FC = 0,44; p = 0,0416) evidenciando o seu papel central nas vias de sinalização inflamatória. O gene NLRP12 teve a sua expressão reduzida no grupo SRREP em detrimento ao CRREP (FC = 0,54; p =0,0166) no tempo de 6 meses, indicando sua ação como regulador negativo da inflamação. As dosagens séricas de IFN-α não foram estatisticamente significativas em nossa análise amostral, mas a sua avaliação auxilia na definição do prognóstico. Os dados sugerem um envolvimento importante dos genes alvos na desregulação imunológica, reforçando o seu papel como possíveis biomarcadores preditores de resposta terapêutica.

O metabolismo ósseo é regulado pelas atividades de síntese e reabsorção, promovida pelos osteoblastos e osteoclastos, respectivamente. O desbalanço entre essas funções podem levar a deterioração e fragilidade do osso, condição associada a diversas doenças com acometimentos ósseos, sendo a mais conhecida e com maior incidência a osteoporose (OP). No entanto, o microambiente ósseo é complexo e funciona como uma rede integrada de sinalização entre células imunes, células progenitoras, fatores de crescimento e produção de citocinas como o interferon gama (IFN-γ). Nesse contexto, o termo osteoimunologia aponta para o caráter influenciador do sistema imune, na fisiologia óssea. Levando em consideração esses aspectos, o trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do interferon gama (IFN-γ) na expressão dos genes remodelação óssea em células de osteosarcoma humano (SaOs-2). Para isso foi realizado ensaio de citotoxidade, em células previamente diferenciadas, com intuito de definir a concentração a ser testada. Posteriormente, foram avaliados a expressão dos genes OPG, RANKL, SPP1 e ALPL sob estímulo de IFN-γ nos tempos de 6, 8 e 24 horas, além dos genes de referência GAPDH e RPLP0, por meio de qPCR utilizando sondas TaqMan. Quando comparado ao grupo sem estímulo (S/E) observamos aumento na expressão do gene SPP1, no tempo de 6 e 8h (FC= 5,14 p= 0,0091 e FC= 5,49 ± p= 0,0137) respectivamente. Enquanto a OPG teve aumento apenas no tempo 24h (FC= 2,69 p = 0,03), junto com o RANKL (FC= 2,69 ± 0,98 p= 0,03). Diferentemente, a ALPL (FC= 0,19 p= 0,02) mostrou perfil de diminuição no tempo de 24h. Na análise ANOVA houve uma diminuição da expressão do SPP1 em relação ao tempo 6h e 24h (FC= 0,23 p= 0,0053) e 8h para 24h (FC= 0,18 p= 0,0023). Contrariamente, a OPG aumentou sua expressão no tempo 24h, quando comparado ao tempo 6h e 8h (FC= 1,2 p= 0,0078; FC= 1,95 p= 0,02) respectivamente. Esses resultados contribuem para a melhor compreensão do impacto do IFN-γ como um ativador do metabolismo ósseo, destacando o tempo de exposição como um fator crucial para desempenho de sua função. 

Liquorilactobacillus vini é uma bactéria ácido-láctica associada a fermentações alcoólicas de vinho e etanol. Acepa de Li.vini JP7.8.9 foi isolada de uma destilaria de etanol no Nordeste do Brasil e tem sido estudada comomodelo de resposta a estresse em lactobacilos. Li .vini ocupa a posição basal dentro do gênero Liquorilactobacillus e apresenta um conjunto de características metabólicas e genômicas que refletem suaadaptação a ambientes líquidos de fermentação. Entre essas características, destacam-se a versatilidade nometabolismo de carboidratos, incluindo a assimilação de glicose, sacarose, celobiose e trealose, e asobrevivência a diferentes condições de estresse como a elevada tolerância ao etanol, acidez e variaçõesosmóticas. Por isso, o objetivo desse trabalho foi elucidar os mecanismos metabólicos, evolutivos e molecularesenvolvidos na adaptação ao estresse de Liquorilactobacillus vini. Neste trabalho, foram empregadas abordagensintegrativas envolvendo análises filogenômicas, estudos comparativos de genomas, construção de mutantescom interrupção gênica para os genes relA, ccpA, uspI e uspIII e avaliações fisiológicas em diferentes fontes decarbono e sob diferentes condições de estresse. A análise evolutiva do gênero Liquorilactobacillus revelou umgenoma central com 1023 genes, destacando-se a presença de genes de resposta a estresse e o papel dometabolismo de açúcares na especiação do gênero Liquorilactobacillus. A nível funcional, a interrupção dogene relA, responsável pela síntese e degradação do alarmônio, demonstrou que a resposta estringente em Li.vini apresenta características não canônicas quando comparada a outros Firmicutes, promovendo umdesacoplamento entre percepção de estresse e controle do crescimento celular. O mutante com interrupção dogene relA manteve crescimento mesmo sob condições adversas, indicando que RelA atua como um moduladornegativo do crescimento em resposta a estressores ambientais. Adicionalmente, a análise funcional do geneccpA evidenciou seu papel no metabolismo do carbono, tamanho celular e motilidade, tolerância a antibióticose resposta a estresse oxidativo, mesmo Li.vini JP7.8.9 não apresentando repressão catabólica. Estudosfilogenéticos e estruturais das Proteínas Universais de Estresse (USP) demonstraram a diversidade funcional epadrões evolutivos associados à adaptação a nichos específicos, especialmente em espécies do clado basal dogênero. A interrupção dos genes uspI e uspIII em Li.vini apresentou resultados fisiológicos distintos. Aausência da proteína UspI não alterou o fenótipo de crescimento nas condições de estresse testadas. Emcontrapartida, na ausência da proteína UspIII, houve a redução do crescimento em meio padrão e na presençados estressores osmótico, oxidativo e térmico. De forma integrada, os resultados deste trabalho ampliam oconhecimento sobre os mecanismos regulatórios e evolutivos que sustentam a robustez fisiológica deLiquorilactobacillus vini, consolidando essa espécie como um modelo promissor para o estudo da adaptaçãobacteriana a ambientes industriais e abrindo perspectivas para aplicações em engenharia genética ebiotecnologia de bactérias ácido-lácticas.

O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] é uma leguminosa de elevada importância socioeconômica, principalmente em regiões semiáridas do Brasil e do mundo. No entanto, sofre perdas significativas causadas por fitopatógenos e pragas virais. Dentre as viroses destaca-se o Cowpea Aphid-borne mosaic virus (CABMV), vírus de RNA fita simples sentido positivo, o qual apresenta na extremidade 5’ a proteína do genoma viral (VPg). O CABMV sequestra a maquinaria de tradução do hospedeiro ao interagir sua proteína VPg com os fatores de iniciação da tradução 4E (eIF4E), mimetizando o 5’cap do mRNA do hospedeiro, o que garante a replicação viral e resulta em sintomas como mosaico e distorções foliares. Mutações no gene eIF4E já foram associadas à resistência recessiva a outros vírus da família Potyviridae, mas seu papel na interação CABMV e V. unguiculata era inexplorado. Nesse cenário, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a relação de mutações no gene eIF4E do feijão-caupi e a possível resistência ao CABMV. Para identificar genótipos com mutações relacionadas à resistência ou suscetibilidade, o gene eIF4E de três cultivares com fenótipos descritos (Boca Negra e BR14 Mulato, suscetíveis; IT85F-2687, resistente) foi sequenciado. Embora as sequências fossem altamente conservadas, cinco mutações foram identificadas, incluindo duas não sinônimas. Com base nisso, dois pares de primers foram desenvolvidos e testados em 27 cultivares, acompanhados por bioensaios com inoculação do CABMV. Das 17 cultivares positivas para mutações associadas à suscetibilidade, 15 apresentaram sintomas após a infecção, enquanto 5 das 8 cultivares com mutações para resistência permaneceram assintomáticas. Duas cultivares não amplificaram devido a mutações adicionais, mas exibiram resistência ao CABMV nos bioensaios. Casos de resistência incompleta sugerem a influência de mutações na VPg ou outros genes ainda não descritos. Paralelamente, análises in silico com cinco cultivares foram realizadas. Modelos teóricos gerados no AlphaFold 3 mostraram que mutações não sinônimas alteram a dinâmica estrutural da eIF4E, especialmente na interação com a VPg. Simulações de dinâmica molecular (MD) revelaram que a ligação VPg-eIF4E induz ajustes estruturais e maior estabilidade em cultivares resistentes. Análises de cargas eletrostáticas indicaram perfis complementares entre VPg e eIF4E, reforçando o papel central desse mecanismo no sequestro da maquinaria de tradução. A análise da energia livre de ligação e da área de interação eIF4E-VPg mostrou que cultivares suscetíveis têm maior afinidade pela VPg, enquanto resistentes exibem valores intermediários, sugerindo outros fatores na determinação do fenótipo. Este estudo descreve pela primeira vez o papel do gene eIF4E na infecção por CABMV em V. unguiculata, fornecendo bases para estratégias de manejo, melhoramento genético e investigações futuras sobre resistência. 

A Filariose Linfática (FL) é uma doença parasitológica de regiões tropicais e subtropicais que afeta milhões de pessoas, sendo causada pelos nematódeos Wuchereria bancrofti, Brugia malayi e B. timori.  Devido aos esforços correntes de eliminação da doença com tratamentos de droga em massa e constante monitoramento de regiões epidêmicas, o padrão de carga parasitológica tem mudado, se tornado mais presente pacientes com baixa carga parasitária e amicrofilarêmicos. Surge então a necessidade de testes de diagnósticos mais eficazes para esse perfil, para uma vigilância mais eficaz e que assegure a erradicação da doença. Neste sentido, testes sorológicos baseados em proteínas recombinantes são então a melhor alternativa de diagnóstico, mas os testes disponíveis podem não ter o desempenho adequado. A proteína WbT é uma proteína recombinante variante das proteínas Wb14 e WbSXP-1, ambas relacionadas a fase L3 da larva de W. bancrofti, que foi previamente indicada como base para um teste sorológico do tipo ELISA para FL. A WbT é uma versão truncada da Wb14, sendo menos hidrofóbica e mais fácil de se produzir em sistema procarioto. Em testes pilotos esta proteína apresentou 90% de sensibilidade com indivíduos sabidamente positivos para FL. Visando melhor avaliar o seu uso no diagnóstico e na vigilância epidemiológica da FL, foram realizados neste estudo novos ensaios de padronização do ELISA com a WbT. Este ensaio foi então avaliado de forma comparativa com um painel de soros de área endêmica previamente testados com três sistemas comerciais disponíveis para o diagnóstico sorológico da FL (Og4C3, Wb123 e Bm14). De um total de 448 soros testados 41 apresentaram resultados positivos com ao menos um dos testes comerciais, sendo que 17 destes soros (41%), também foram positivos com o ELISA-WbT. Dos seis soros positivos em dois dos testes comerciais (Wb123 e Bm14), quatro (66%) também foram positivos com a WbT. Um total de 24 soros reagiram com a WbT mas não apresentaram resultados positivos com os demais testes. Os resultados reforçam a falta de concordância entre os testes comerciais disponíveis na atualidade para FL justificando a produção de novos ensaios baseados em proteínas recombinantes para o diagnóstico e vigilância da FL. O potencial da WbT necessita de testes com paineis de soros mais específicos, para entender o real papel dessa proteína na vigilância epidemiológica da FL, podendo ser utilizada como parte da construção de proteínas multiantígenos.

A deficiência na recuperação imunológica ocorre quando pessoas vivendo com o vírus da imunodeficiência humana (PVHIV) não reconstituem os linfócitos T CD4+, mesmo após a supressão da carga viral. Apesar de multifatorial, a exaustão celular pode ser um dos mecanismos que contribuem para a deficiência na recuperação imunológica. Os receptores de checkpoint imunológicos são marcadores de exaustão celular durante a infecção pelo HIV. O objetivo do estudo foi avaliar como a expressão dos genes responsáveis por esses receptores (PDCD1, CTLA4, TIGIT e HAVCR2) podem influenciar na reconstituição imune de PVHIV. Foram analisadas as expressões desses genes em 36 homens que vivem com HIV a partir de PCR em tempo real, utilizando sondas TaqMan. Além dos genes alvos, também foram utilizados no estudo três genes de referência (ACTB, GAPDH e RPLP0). As expressões de PDCD1 (p=0.0003) e TIGIT (p=0.0055) demonstraram diferenças estatisticamente significativas, maiores níveis desses genes foram observados nos indivíduos com a deficiência na recuperação imunológica. Paralelamente, não encontramos diferença estatisticamente significativa entre os grupos para CTLA4 (p=0.5356) e HAVCR2 (p=0.3695). Esses resultados contribuem para a compreensão da deficiência na recuperação imunológica, mas novos estudos analisados mais genes em uma população maior ainda se fazem necessários.

A Neoplasia Mielodisplásica (SMD) é um grupo heterogêneo de neoplasias clonais originadas de células-tronco hematopoiéticas, caracterizadas por hematopoiese ineficaz, citopenias periféricas e risco elevado de progressão para Leucemia Mieloide Aguda. A regulação epitranscricional por meio da metilação do RNA na posição N⁶ da adenosina (m⁶A) mediada pelas metiltransferases METTL3 e METTL14 é essencial para o controle da expressão gênica de alvos importantes para a hematopoiese, mas sua contribuição para a fisiopatologia da SMD ainda não está totalmente esclarecida. Portanto, este estudo teve como objetivo investigar a associação entre os níveis de expressão dos genes METTL3 e METTL14 e as características clínicas e moleculares de pacientes com SMD. Para isso, foi realizada uma análise de dados transcriptômicos (GSE58831 e GSE114922) de células CD34+ de pacientes com SMD, utilizando análises de sobrevida, expressão diferencial e enriquecimento gênico. Os resultados demonstraram que a alta expressão de METTL3 associou-se às características de pior prognóstico, como maior risco pelo IPSS-R e maior porcentagem de blastos, configurando-se como um fator de risco independente para menor sobrevida global. A análise funcional revelou uma dicotomia: a alta expressão de METTL3 e METTL14 associou-se às vias de manutenção de células-tronco, enquanto a baixa expressão esteve ligada a um perfil de alta atividade metabólica, com enriquecimento de vias de fosforilação oxidativa. Portanto, conclui-se que a alta expressão de METTL3 e METTL14 é um marcador prognóstico adverso na SMD. Demonstrando que a regulação epitranscricional por m⁶A, através da análise de expressão gênica dessas metiltransferases, promove programas transcricionais distintos que regulam o equilíbrio da manutenção das células tronco e da atividade metabólica dos componentes celulares de pacientes com SMD.

Indivíduos com anemia falciforme (AF) apresentam significativa heterogeneidade clínica atribuída a vários fatores, incluindo modificadores genéticos. Os níveis de hemoglobina fetal (Hb F) têm sido associados a um curso clínico mais brando na AF. Dada a importância da Hb F na fisiopatologia da doença, numerosos estudos têm se concentrado em descrever como a Hb F melhora o fenótipo clínico e em identificar moduladores da gama-globina ainda não caracterizados. Neste trabalho, avaliamos a associação de variantes nos genes BCL11A (rs4671393, rs1427407, rs11886868) e HBS1L-MYB (rs9399137) com os níveis de Hb F e complicações clínicas em 409 pacientes com AF. Além disso, realizamos um experimento de sequenciamento de RNA (RNAseq) para analisar o transcriptoma de reticulócitos de 8 pacientes com AF, sendo 4 com Hb F basal alta (mediana: 20,5%, intervalo: 19,6% - 22,4%) e 4 com Hb F basal baixa (mediana: 4,1%, intervalo: 0,8% - 5,4%). Os resultados da genotipagem mostraram que as variantes de BCL11A e HBS1L-MYB estão significativamente associadas aos níveis de Hb F, bem como ao risco e à incidência cumulativa de complicações da AF. Em especial a variante HBS1L-MYB rs9399137, foi a que mais contribuiu para a variação nos níveis de Hb F e esteve associada com a ocorrência de quatro compilações clínicas. Além disso, um escore de risco genético refletindo o efeito combinado dessas variantes, mostrou-se associado aos níveis de Hb F e ao risco de complicações como acidente vascular cerebral, osteonecrose, úlceras de pernas, priapismo e síndrome torácica aguda. Nas análises de sequenciamento, identificamos 89 genes e 168 transcritos diferencialmente expressos entre os grupos. A anotação funcional revelou que níveis elevados de Hb F estão associados à expressão de genes e transcritos relacionados a diversos processos biológicos, incluindo resposta imune, organização do citoesqueleto, equilíbrio redox, apoptose, transdução de sinais intracelulares e expressão de RNA. Dessa forma, o perfil de expressão de pacientes com níveis elevados de Hb F sugere que esses indivíduos apresentam uma melhora na reologia celular, estabilização do citoesqueleto e diminuição na geração de espécies reativas de oxigênio. Além disso, a via de sinalização Wnt/β-catenina pode estar ativa em pacientes com Hb F elevada, contribuindo para melhores parâmetros de reologia celular. Por fim, o transcrito do gene KDM1A, um regulador epigenético previamente descrito na hematopoiese, apresentou expressão reduzida nos pacientes com Hb F elevada, confirmando seu papel na regulação da gama-globina. Além disso, o regulador eritropoiético ASH1L pode ser um potencial alvo para a modulação da expressão da Hb F. Esses achados reforçam a importância dos modificadores genéticos na regulação dos níveis de Hb F e variabilidade clínica da doença e sugerem mecanismos moleculares associados com níveis elevados de Hb F.

A iniciação da tradução em eucariotos é um processo altamente regulado, no qual a proteína eIF4E desempenha papel essencial ao reconhecer a extremidade 5' do mRNA por meio de sua ligação à estrutura cap, possibilitando o recrutamento das subunidades ribossomais. No complexo eIF4F, eIF4E atua em associação com eIF4G e eIF4A, na regulação da síntese proteica. Em tripanosomatídeos, gêneros Trypanosoma e Leishmania, foram identificados múltiplos homólogos de eIF4E e eIF4G que formam complexos do tipo eIF4F funcionalmente distintos, porém ainda pouco caracterizados. Entre esses, destaca-se a proteína EIF4E5 de Leishmania infantum, cuja caracterização recente revelou interações com os parceiros EIF4G1, G1-IP, a proteína de ligação ao RNA G1-IP2 e as proteínas adaptadoras 14-3-3I/II, indicando a conservação de um subcomplexo previamente descrito em Trypanosoma brucei. A presença de quinases associadas, sugerem que a fosforilação pode modular a função do complexo. Foram identificados resíduos fosforilados exclusivos na região C-terminal do EIF4E5 em L. infantum, ausentes nos ortólogos de Trypanosoma, o que aponta para possíveis divergências entre os gêneros. Diante desse contexto, o presente estudo teve como objetivo investigar a função do eIF4E5 em L. infantum, com ênfase na influência da fosforilação sobre suas interações com parceiros proteicos, além de identificar quinases associadas e mRNAs-alvo mediados pela G1-IP2, buscando compreender a dinâmica desse subcomplexo no parasita. Para isso, foram construídos plasmídeos contendo os genes de interesse, destinados à transfecção em células promastigotas de L. infantum, visando à superexpressão de proteínas fusionadas ao epítopo HA. As linhagens celulares foram empregadas nas análises de interação proteína-proteína, realizadas por imunoprecipitação seguida de espectrometria de massas. As abordagens foram aplicadas às variantes de EIF4E5 contendo mutações em sítios de fosforilação, às proteínas quinases (CRK3 e RDK2) e à G1-IP2. Adicionalmente, realizou-se o sequenciamento de mRNAs com o intuito de identificar transcritos associados à G1-IP2. A proteína EIF4E5 de Leishmania infantum foi então analisada quanto à influência da fosforilação em suas interações proteicas. Os resultados da comparação entre EIF4E5 selvagem e os mutantes que abolem (S→A) ou mimetizam (S→E) a fosforilação sugerem que esta modificação pode influenciar sua rede de interações proteicas. Foi visto que a posição do epítopo HA também influenciou de certa forma a coprecipitação de parceiros detectados. As análises de imunoprecipitação de CRK3 e RDK2 indicaram associações compatíveis com funções regulatórias no ciclo celular. A G1-IP2 apresentou interação com diversos transcritos, incluindo proteínas de ligação a RNA, quinases e proteínas hipotéticas, com sobreposição parcial entre os dados RNA-seq e espectrometria de massas, além de variação durante o ciclo celular nos perfis de 24h, 48h e 72h. Em resumo, esses achados ampliam o entendimento da regulação traducional em L. infantum e destacam a complexidade do controle pós-transcricional nesse parasita.

A anemia falciforme (AF) é uma doença hereditária caracterizada por inflamação crônica e diversas complicações clínicas, entre as quais se destacam as úlceras de perna ou maleolares (UMs). Estudos recentes têm evidenciado o papel central das citocinas pró inflamatórias e dos genes do inflamassoma NLRP3 na fisiopatologia dessas lesões. Neste estudo, foram avaliados 96 adultos, divididos em quatro grupos: 23 com AF e UMs abertas (UMA), 22 com AF e UMs fechadas (UMF), 31 controles HbSS sem UMs e 20 controles HbAA. Os resultados mostraram que os níveis de hemoglobina fetal (HbF) e hemoglobina total foram significativamente menores no grupo UMA, sugerindo maior gravidade clínica nesse subgrupo. A dosagem das citocinas séricas revelou níveis elevados de TNF-α e IL-12p70 em pacientes com UM, inclusive naqueles sob tratamento com hidroxiureia (HU), indicando inflamação persistente apesar da terapia convencional. A análise discriminante (PLS-DA) demonstrou separação parcial dos grupos com base nos níveis de citocinas, e os escores de importância variável (VIP) destacaram TNF-α e IL-8 como citocinas essenciais para distinguir entre os grupos clínicos. Observou-se ainda forte correlação entre citocinas inflamatórias e marcadores hemolíticos, sugerindo uma inter-relação entre hemólise, inflamação e dano tecidual. No que se refere à expressão gênica, CASP1 apresentou níveis significativamente maiores no grupo UMF em comparação aos controles HbAA, enquanto NLRP3 mostrou expressão aumentada tanto nos grupos UMF quanto UMA. Por outro lado, IL18 apresentou redução significativa de expressão nos grupos UMA e UMF em relação ao grupo Controle-HbSS, independentemente do uso de HU, sugerindo que a hidroxiureia não modula a transcrição desse gene nesse contexto. Esses achados indicam que a diminuição da expressão de IL18 pode estar associada à cronicidade das úlceras de perna na AF, independentemente do estágio da doença ou da terapia utilizada. Em conjunto, nossos achados reforçam que as úlceras de perna na AF resultam de uma interação multifatorial entre inflamação crônica, hemólise e comprometimento da cicatrização de feridas. Níveis elevados de citocinas, especialmente TNF-α, em pacientes com úlceras ativas e cicatrizadas, destacam o ambiente inflamatório persistente associado a essa complicação, mesmo após a resolução clínica. Além disso, sugerem uma desregulação da sinalização mediada por IL-18 no ambiente inflamatório crônico das UMs, ressaltando a importância de abordagens terapêuticas complementares, como terapias anti citocinas, e sugerindo que TNF-α, IL-8, CASP1, NLRP3 e IL-18 podem ser potenciais biomarcadores e alvos para o manejo futuro dessas complicações na AF. Pesquisas futuras devem se concentrar nos mecanismos de inflamação crônica e nas vias do inflamassoma para desenvolver tratamentos personalizados e eficazes para pacientes com AF e UMs.

Os eventos macroecológicos passados no Nordeste brasileiro, como os ciclos glaciais e interglaciais no Pleistoceno e a formação da Diagonal Seca, moldaram a estrutura genética exibida por populações atuais nas diferentes escalas espaciais. Os répteis são excelentes modelos de estudos filogeográficos devido a sua ecologia e fisiologia. A espécie Philodryas olfersii, é uma serpente semi-arborícola que se distribui amplamente na América do Sul. Nosso principal objetivo foi avaliar a estruturação populacional existente em P. olfersii, determinando quais fatores estão influenciando sua distribuição genética. O DNA de indivíduos dos estados de Pernambuco, Paraíba, Alagoas e Rio Grande do Norte, foi extraído e submetido ao processo de PCR para os marcadores moleculares 16S, ND4 e COI. A diferenciação genética foi inferida pela AMOVA e valores de FST e a estruturação populacional foi realizada pelo pacote Geneland no software R. Ao todo foram utilizadas 17 amostras de 16S, 9 amostras de ND4 e 20 de COI. Os resultados da AMOVA destacara que existe mais diferenciação genética dentro das populações do que entre elas. Os valores de FST indicaram que existem populações geneticamente bem distintas, enquanto outras são mais similares. O Geneland recuperou a existência de populações genéticas bem definidas, sendo uma na região mais sul agrupando Alagoas, sul de Pernambuco e Piauí, outro cluster agrupando a Região Metropolitana de Recife e Paraíba, e outro mais ao norte com as amostras do Rio Grande do Norte.

O câncer de mama hereditário, vinculado a variantes patogênicas em genes de alta penetrância representa cerca de 5-10% dos casos. Este estudo buscou analisar esses genes, proporcionando uma visão atualizada sobre o tema. A revisão envolveu 3103 artigos, priorizando a origem das publicações. Foi realizada uma análise detalhada das variantes patogênicas e provavelmente patogênicas no ClinVar em BRCA1, BRCA2, CDH1, PALB2, PTEN, STK11 e TP53, selecionadas pelas associações com o maior número de condições clínicas. Observou-se uma frequência elevada de publicações nos países do Hemisfério Norte, em detrimento da África e América Latina. Em todos os genes estudados, variantes com conflitos de classificações foram identificadas. As variantes em BRCA1 e BRCA2, como c.5153-2del e c.1909+1G>A, destacaram-se. CDH1 apresentou a variante c.1901C>T como mutação fundadora em Portugal. Em PALB2, a variante c.757_758del foi prevalente em populações miscigenadas. PTEN exibiu as variantes c.209+1G>A e c.634+5G>A, predominantes em populações europeias finlandesas e americanas miscigenadas. STK11 destacou as variantes c.290+1G>A, c.464+1G>T e c.719C>A, com maiores frequências alélicas em populações afroamericanas, europeias e sul-asiáticas. Em TP53, a variante c.799C>T foi associada a múltiplas condições, predominando em populações sul-asiáticas e europeias. No geral, este estudo demonstrou a importância de uma atualização do conhecimento relacionado aos genes de alta penetrância envolvidos no câncer de mama hereditário.

Peptídeos antimicrobianos (AMPs, do inglês Antimicrobial Peptides) são moléculas

chave na defesa de diversos organismos na luta contra patógenos. Este estudo

explorou os potenciais na identificação e caracterização de AMPs em dados

genômicos e transcriptômicos, sendo divido em dois capítulos. No capítulo I, explorou-

se a identificação de assinaturas moleculares de AMPs e no desenvolvimento de uma

ferramenta, o AMP-Identifier, baseada em modelos de aprendizado de máquina para

análise e prospecção dessas moléculas em dados genômicos. Para tal, modelos de

aprendizado de máquina (SVM, KNN, Random Forest, Árvore de Decisão, Naive

Bayes e Redes Neurais) foram treinados com dados previamente rotulados com

dados físico-químicos. Os resultados obtidos sugerem eficácia na classificação de

AMPs com destaque para os modelos baseados em Redes Neurais (acurácia = 90%

e precisão = 92%) e SVM (acurácia = 90% e precisão = 88%). Esses resultados abrem

novas vias para a prospecção de novas biomoléculas em dados ômicos ainda não

explorados. No capítulo II, cinco novas defensinas (RcDef1-5) foram identificadas no

genoma de R. communis e caracterizadas por meio de ferramentas de bioinformática,

análises físico-químicas e modelagem molecular. As RcDef apresentaram

características típicas de AMPs, como carga líquida positiva e baixo peso molecular.

A análise transcriptômica revelou a expressão de quatro defensinas e a presença de

múltiplas isoformas. A RcDef1 demonstrou expressão diferencial em resposta a

diferentes estresses, sendo reprimida por salinidade e induzida por infecção fúngica e

injúria. A modelagem molecular dos homodímeros de RcDef revelou estruturas

catiônicas em pinça, possivelmente envolvidas na interação com alvos moleculares

de patógenos. De forma geral, este estudo em sua essência contribui para a

descoberta de novos AMPs e para a compreensão de seu papel, especialmente na

defesa de plantas, com potencial aplicação no desenvolvimento de novas estratégias

para controle de doenças e desenvolvimento de antimicrobianos, além de propor

novas abordagens para a exploração de biomoléculas em dados genômicos.

A Jatropha curcas L. é uma planta oleaginosa tolerante à seca, com potencial na produção de biocombustíveis. No entanto, a salinidade do solo representa um problema significativo, afetando negativamente sua produtividade. O crescimento das plantas sob estresses envolve complexos mecanismos de regulação genética, incluindo a interação de fitormônios e fatores de transcrição (FTs). O presente trabalho, objetivou identificar potenciais FTs associados aos genes envolvidos nas vias de transdução por fitormônios (auxina, citocinina, giberelina, ácido abscísico, etileno, jasmonato, brassinoesteróides, ácido salicílico e estrigolactonas) em J. curcas. Além disso, foi analisada a expressão gênica diferencial dessas vias em dois acessos da planta (Jc171 - moderadamente tolerante e Jc183 – tolerante a 150 mM NaCl) após exposição por 3 horas. Os genes envolvidos nessas vias revelaram a presença de FTs de diversas famílias importantes para respostas a estresses abióticos, com 17 delas sendo as mais representadas, incluindo ERF, DOF, C2H2, MYB, bHLH, bZIP, LBD, GRAS, BBR-BPC, TCP, NIN-LIKE, TALE, TRIHELIX, HD-ZIP, ARF e MICK-MADS. Foi constatado que o acesso Jc171 apresentou um maior número de transcritos diferencialmente expressos dentro das vias de fitormônios. Esse aumento pode indicar uma resposta mais ampla e intensa ao estresse salino, refletindo a dificuldade deste acesso em lidar com o estresse de maneira eficiente. A ativação desses genes nas vias de fitormônios sugere um papel potencial dos FTs na regulação da expressão gênica associada ao estresse. Os resultados deste estudo ampliam o conhecimento sobre os mecanismos moleculares que governam as respostas de J. curcas ao estresse salino, e poderão servir de fundamento para futuras pesquisas e práticas agrícolas que visem aprimorar a tolerância e a produtividade desta cultura em condições de salinidade.

Os tripanosomatídeos são protozoários flagelados responsáveis por várias doenças tidas como negligenciadas e se caracterizam por apresentar algumas peculiaridades biológicas no que diz respeito a mecanismo de controle da expressão gênica, regulada por eventos predominantemente pós-transcricionais e que inclui eventos regulatórios durante a tradução dos mRNAs. Em eucariotos, o reconhecimento do cap do mRNA pela subunidade 4E do complexo heterotrimérico eIF4F é considerado um elemento chave no processo de iniciação da tradução, tendo em vista que diferenças cinéticas nas interações eIF4F-mRNA podem mediar diferenças na eficiência da tradução entre mRNAs. Múltiplos homólogos foram identificados em tripanosomatídeos formando diferentes complexos do tipo eIF4F. Esse trabalho buscou estudar e caracterizar o complexo formado pelas proteínas EIF4E6/EIFG5/EIFG5-IP em T. brucei. Foram investigadas as interações moleculares envolvidas na interação EIF4E6/EIF4G5 por ensaios in vitro de interação de proteína-proteína e cristalografia. Onde um peptídeo na região N-terminal da EIF4G5 é responsável pela formação e interação entre a proteína EIF4E6 pertencente ao complexo. Posteriormente buscamos mapear as interações envolvidas entre o EIF4G5/EIF4G5-IP para isso três regiões conservadas no EIF4G5 sofreram substituição de seus aminoácidos para codificação de alaninas por mutagênese sítio dirigida e foram expressas em células procíclicas fusionadas ao epítopo HA e usadas em ensaios de imunoprecipitação. A análise de proteínas coprecipitadas mostraram a perda da interação entre as proteínas EIF4G5 e EIF5G5-IP sem ocorrer nenhum impacto na interação com a terceira proteína pertencente ao complexo, TbEIF4E6. E a presença de inúmeras proteínas da zona de fixação do flagelo e de citoesqueleto, por fim, confirmamos a atuação desse complexo na fase sanguínea atuando no processo de tradução, com a presença de diversas proteínas ribossomais 40S e 60S, além de outros fatores de tradução. Sendo assim, nossos experimentos devem ajudar a entender melhor o papel deste complexo na espécie de T. brucei.

Introdução: A proteína Spike do SARS-CoV-2 permite o ingresso do vírus na célula pela sua interação com o receptor ECA-2, sendo o principal objetivo para a produção de novos modelos vacinais. As vacinas da Moderna (RNAm-1273), Pfizer-BioNTech, AstraZeneca (AZD1222), da Johnson & Johnson (Ad26.COV-2-S) e da “Nuvaxovid™” (NVX-CoV2373) utilizam a proteína Spike para a ativação da resposta imune tanto celular como humoral contra o SARS-CoV-2. Dentre as plataformas vacinais (Ácidos Nucleicos, VLP, Vetores Virais, Proteínas Recombinantes), o uso de leveduras como modelo vacinal, conseguem manter as modificações pós-traducionais das proteínas heterólogas, e quando usadas como modelo vacinal em animais, leva a ativação da resposta imune com produção de anticorpos neutralizantes. As ferramentas moleculares permitem, nas leveduras, a ancoragem das proteínas na porção externa da parede celular, facilitando a interação do antígeno com as células imunológicas e direcionando a resposta na produção de linfócitos CD4+ e CD8+ ativos, além da produção de anticorpos específicos contra o patógeno-alvo. Objetivo: O presente estudo propõe o uso da P. pastoris GS115 com a proteína Spike ancorada na parede como um novo modelo vacinal contra o SARS-CoV-2. Metodologia: Foi utilizado o vetor de expressão pPGKΔ3-αAG para clonagem do gene Spike. A partir dos clones confirmados, o DNA plasmidial obtido foi tratado com SacI e logo inserido na levedura por eletroporação. As leveduras recombinantes foram cultivadas em meio YPD para a confirmação da proteína Spike pelo método de Western Blot, e a confirmação da ancoragem por Yeast-ELISA. A vacinação dos camundongos com 1x108 células de P. pastoris-Spike, permitiu avaliar a segurança das leveduras e a resposta imunológica. Resultados e discussão: Após a confirmação da ancoragem da proteína Spike pelo o Yeast-ELISA e a vacinação dos camundongos com a levedura recombinante, foi observado a ativação e a produção dos linfócitos CD4+ ativos contra o SARS-CoV2 no modelo murino. A linfopenia presente em pacientes adoecidos pela COVID-19 e a diminuição dos linfócitos T CD4+/CD45, compromete a resposta imune adaptativa. Neste estudo, identificamos a presença dos linfócitos CD4+/CD45 que são importantes na manutenção da ativação da resposta dos linfócitos B e T direcionados ao antígeno. Os anticorpos neutralizantes achados após a vacinação, são gerados não só pela presença do RBD, mas também do NTD, e dos epítopos lineais S15P5 e S21P2 presentes na proteína Spike, tornado a Spike um promissor antígeno vacinal. Conclusões: Assim, a estratégia vacinal utilizada permitiu a ancoragem da proteína Spike na parede da P. pastoris GS115 e quando utilizada como modelo vacinal induziu de forma segura a estimulação do sistema imune, direcionando a resposta na produção de linfócitos T CD4+/CD45+ e anticorpos neutralizantes contra o SARS-CoV-2.

A emergência e reemergência de doenças infectocontagiosas causadas por patógenos virais, como o SARS-CoV-2, traz a necessidade do desenvolvimento de novas tecnologias profiláticas e terapêuticas para contenção da disseminação viral e tratamento da doença. Nesse sentido, uma abordagem promissora é a prospecção de moléculas bioativas de plantas e microrganismos com potencial antiviral. A palma-forrageira (Opuntia sp.) e Bacillus subtilis são fontes de peptídeos/proteínas com propriedades farmacoterapêuticas, destacando-se a surfactina, inibidores de proteases (IPs), ribonucleases (RNAses), lectinas, rRNA N-glicosilases, entre outros. Tais bioativos, além de não apresentarem citotoxicidade relevante, são relatados como eficientes inibidores da replicação de vírus envelopados, e podem ser utilizados no desenvolvimento de novas estratégias biotecnológicas antivirais. O presente estudo visa identificar, através de métodos bioquímicos e moleculares, potenciais proteínas antivirais de Opuntia sp. e B. subtilis, e avaliar seu potencial em reduzir a infectividade do SARS-CoV-2. A surfactina, lipopetídeo cíclico sintetizado por B. subtilis e as proteínas antivirais presentes nos cladódios de Opuntia stricta clone IPA200016 foram obtidas por protocolos específicos e caracterizadas qualitativa e quantitativamente através de métodos cromatográficos (HPLC) e espectrométricos (LC-MS/MS). Posteriormente, as proteínas foram avaliadas quanto a sua citotoxicidade pelo método MTT e sua atividade contra o SARS-COV-2 mensurada por TCID₅₀/mL em células Vero CCL-81. Os genótipos de B. subtilis UFPEDA 438, QST 713-like e UFRA-92 se mostraram excelentes produtores de surfactina, as quais apresentaram concentrações citotóxica mínimas (CC₂₀) de 61,9 µM até 131,1 µM. A surfactina de B. subtilis UFPEDA 438 e a comercial (≥ 98% pureza) exibiram atividade contra o SARS-CoV-2, com redução dos títulos virais em 1,63 log₁₀ e 2 log₁₀ TCID₅₀/mL. Em relação aos peptídeos obtidos dos cladódios de O. stricta IPA200016, foram identificadas nas frações proteicas precipitadas em concentrações 0–30 % e 30–60 % de sulfato de amônio (m:v), proteínas com potencial antiviral como inibidores de serino e cisteíno proteases, lectinas, rRNA N-glicosilases. As frações proteicas exibiram valores CC₂₀ de 39 µg (0-30%) e 37,4 µg (30–60 %), porém somente a 30-60 % apresentou reduções nos títulos virais em 1,5 log₁₀ TCID₅₀/mL. Por fim, a fração enriquecida de ribonuclease, também obtida dos cladódios de palma-forrageira, apresentou alta atividade nucleolítica e exibiu valores de CC₂₀ de 39 µg, porém não foi efetiva em reduzir a infectividade do SARS-CoV-2. Os resultados obtidos demonstram a eficácia de proteínas / peptídeos oriundos de fontes naturais e que poderão ser aplicados em futuras estratégias no combate ao SARS-CoV-2.A emergência e reemergência de doenças infectocontagiosas causadas por patógenos virais, como o SARS-CoV-2, traz a necessidade do desenvolvimento de novas tecnologias profiláticas e terapêuticas para contenção da disseminação viral e tratamento da doença. Nesse sentido, uma abordagem promissora é a prospecção de moléculas bioativas de plantas e microrganismos com potencial antiviral. A palma-forrageira (Opuntia sp.) e Bacillus subtilis são fontes de peptídeos/proteínas com propriedades farmacoterapêuticas, destacando-se a surfactina, inibidores de proteases (IPs), ribonucleases (RNAses), lectinas, rRNA N-glicosilases, entre outros. Tais bioativos, além de não apresentarem citotoxicidade relevante, são relatados como eficientes inibidores da replicação de vírus envelopados, e podem ser utilizados no desenvolvimento de novas estratégias biotecnológicas antivirais. O presente estudo visa identificar, através de métodos bioquímicos e moleculares, potenciais proteínas antivirais de Opuntia sp. e B. subtilis, e avaliar seu potencial em reduzir a infectividade do SARS-CoV-2. A surfactina, lipopetídeo cíclico sintetizado por B. subtilis e as proteínas antivirais presentes nos cladódios de Opuntia stricta clone IPA200016 foram obtidas por protocolos específicos e caracterizadas qualitativa e quantitativamente através de métodos cromatográficos (HPLC) e espectrométricos (LC-MS/MS). Posteriormente, as proteínas foram avaliadas quanto a sua citotoxicidade pelo método MTT e sua atividade contra o SARS-COV-2 mensurada por TCID₅₀/mL em células Vero CCL-81. Os genótipos de B. subtilis UFPEDA 438, QST 713-like e UFRA-92 se mostraram excelentes produtores de surfactina, as quais apresentaram concentrações citotóxica mínimas (CC₂₀) de 61,9 µM até 131,1 µM. A surfactina de B. subtilis UFPEDA 438 e a comercial (≥ 98% pureza) exibiram atividade contra o SARS-CoV-2, com redução dos títulos virais em 1,63 log₁₀ e 2 log₁₀ TCID₅₀/mL. Em relação aos peptídeos obtidos dos cladódios de O. stricta IPA200016, foram identificadas nas frações proteicas precipitadas em concentrações 0–30 % e 30–60 % de sulfato de amônio (m:v), proteínas com potencial antiviral como inibidores de serino e cisteíno proteases, lectinas, rRNA N-glicosilases. As frações proteicas exibiram valores CC₂₀ de 39 µg (0-30%) e 37,4 µg (30–60 %), porém somente a 30-60 % apresentou reduções nos títulos virais em 1,5 log₁₀ TCID₅₀/mL. Por fim, a fração enriquecida de ribonuclease, também obtida dos cladódios de palma-forrageira, apresentou alta atividade nucleolítica e exibiu valores de CC₂₀ de 39 µg, porém não foi efetiva em reduzir a infectividade do SARS-CoV-2. Os resultados obtidos demonstram a eficácia de proteínas / peptídeos oriundos de fontes naturais e que poderão ser aplicados em futuras estratégias no combate ao SARS-CoV-2.

O acidente vascular cerebral (AVC) é uma complicação da anemia falciforme (AF), doença genética mais comum no mundo, relacionada com alta morbidade e mortalidade. Atualmente, a única ferramenta disponível para rastrear o risco de AVC em crianças com AF é o Doppler Transcraniano (DTC). Apesar de suas vantagens, a técnica apresenta algumas limitações que restringem sua capacidade de identificação precoce de pacientes com maior risco. Vários estudos sugerem que alterações em genes não relacionados com a mutação primária da AF possam modular o quadro clínico dos pacientes, contribuindo para o desenvolvimento do AVC. Este trabalho investigou polimorfismos em genes cujas proteínas são importantes na fisiopatologia da AF associados ao risco do desenvolvimento do AVC. Os polimorfismos selecionados foram ANXA2 (rs11853426), TEK (rs489347), TGFBR3 (rs284875), ADCY9 (rs2238432), ENPP1 (rs1044498), a deleção da alfa talassemia (-α3.7Kb) e hapótipos do gene da BS-globina. Foram selecionados para o estudo 403 pacientes com AF menores de 20 anos de idade em acompanhamento regular na Fundação HEMOPE. Os perfis clínicos e laboratoriais foram extraídos dos prontuários clínicos. Os polimorfismos selecionados foram genotipados utilizando Polymerase chain reaction (PCR) em tempo real por discriminação alélica. A pesquisa da deleção da (-3.7-kb foi realizada pela técnica gap-PCR e a determinação dos haplotiplos da βs-globina pelo método de PCR, seguido de análise de restrição. Observamos em nosso estudo que níveis aumentados de HbF tiveram impacto estatístico significativo na diminuição do risco do AVC (p<0,001), assim como níveis menores de leucócitos (p<0,033). O efeito protetor da alfa talassemia contra a ocorrência do AVC não foi estabelecido em nossa população, provavelmente pela pequena quantidade de análises realizadas. Ao avaliarmos os pacientes que desenvolveram AVC com os resultados do DTC, observamos que 34,38% tinham DTC AR (p<0,0001). Esta correlação é confirmada pela literatura. Em nossa coorte há predominância do haplótipo CAR/CAR (57,8%), refletindo na gravidade da doença nestes pacientes, uma vez que 39,8% dos pacientes apresentaram mais que dois episódios de crise álgica ao ano. Não encontramos associação dos haplótipos e nem dos polimorfismos dos genes candidatos com a ocorrência da DCV, provavelmente tornando-os ferramentas não elegíveis na identificação do risco de DCV em nossos pacientes. Os resultados deste estudo indicam que o background genético dos pacientes em nossa população pode alterar a influência dos modificadores genéticos da AF, tornando nossa população adequada para o estudo de variantes genéticas e seus efeitos no desfecho clínico.

Os peptídeos antimicrobianos (AMPs) têm atraído crescente interesse como
alternativas promissoras no tratamento de infecções antimicrobianas, devido à sua

capacidade de combater microrganismos patogênicos, além de efeitos anti-
inflamatórios e imunomoduladores. Este estudo teve como objetivo identificar genes

codificantes para AMPs no genoma do feijão-guandu (Cajanus cajan), desenhar
peptídeos racionalmente modificados com atividade contra bactérias, fungos e/ou
vírus (inclusive o SARS-CoV-2). Foram identificados 50 genes completos codificantes
de Proteínas Transportadoras de Lipídeos (LTPs, Lipid Transfer Proteins) no genoma
de C. cajan, que serviram de base para o desenho racional. Foram gerados e
sintetizados cinco peptídeos racionalmente modificados, designados como RAMPs
(Rationally Modified AntiMicrobial Peptides), com base em análises in silico, levando
em conta as predições de atividade antimicrobiana, estabilidade estrutural e possíveis
efeitos citotóxicos. Um desses peptídeos (PLTP-CAJ1) foi avaliado in vitro quanto ao
seu potencial antimicrobiano, apresentando atividade contra patógenos humanos,
incluindo bactérias (Staphylococcus aureus ATCC 25923, Klebsiella pneumoniae
ATCC 13883 e Acitenobacter baumannii ATCC 19606) em dosagens não citotóxicas
0,16-1.024 μg/mL) conforme avaliado pelo teste MTT. Os RAMPs desenhados têm
potencial para o desenvolvimento de novos fármacos no combate a infecções
causadas por patógenos de interesse clínico. No entanto, antes de sua aplicação
clínica, é crucial que eles sejam submetidos a testes adicionais, incluindo estudos in
vivo, para avaliar sua eficácia e segurança.

As helicases são enzimas essenciais para o splicing, transporte, e degradação dos RNAs, e para o início da tradução destes, enquanto que as proteínas remodeladoras de cromatina Snf2 facilitam a interação de proteínas na expressão gênica, estando ambas associadas a respostas a estresses abióticos. A seca limita a produtividade do feijão-caupi, mesmo em variedades tolerantes. O objetivo do estudo foi identificar e caracterizar a estrutura e função de helicases e Snf2 em Vigna unguiculata (L.) Walp., e analisar sua expressão em ensaio RNA-Seq após desidratação radicular (de 25 e 150 minutos). Foram identificados 187 genes potenciais, incluindo 46 helicases de DNA (RuvB, MCM, RecQ, PIF1, UvrD e RecG), 103 RNA helicases (DEAD, DEAH/DExH-D) e 39 Snf2 (Snf2-like, Swr1-like, Rad54-like, Rad5/16-like, SSO1653-like e SMARCAL1-like), nos 11 cromossomos do genoma. A duplicação segmentar predominou para helicases e em tandem para Snf2. Genes ortólogos foram observados em cinco leguminosas analisadas. Na região promotora dos respectivos genes, foram previstos fatores de transcrição relacionados com respostas a estresses, incluindo ERF, Dof, Myb, TCP, ARF e bZip. A estrutura dos éxons-íntrons mostrou-se conservada nas famílias gênicas. Proteinas helicases/Snf2 apresentaram domínios e motivos conservados da Superfamília 2 de helicases, com variações nas regiões N e C terminais. Alguns transcritos RNA-Seq, como VuDEAD25.1, VuSNF2_22.1, VuSNF2_21.1 e VuSNF2_4.1, apresentaram resposta diferencial aos estímulos, sendo induzidos em 150 minutos. A rede interativa de MCM e RuvB sugeriu participação principalmente na biossíntese de clorofila, vias de sinalização e resposta ao estresse. Esses resultados indicam alvos que podem ser explorados em programas de melhoramento do feijão, como transgenes ou marcadores moleculares.

A fim de se obter uma melhor estratificação de risco, o impacto de alterações moleculares tem sido amplamente estudado em pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA). Além de alterações estruturais e mutações no DNA, expressão aberrante de genes podem influenciar o curso clínico da doença. Nesse contexto, os membros da família PARP (do inglês, Poly(ADP-ribose) polymerases) (PARP1, PARP2 e PARP3), responsáveis por codificar proteínas capazes de exercer modificações pós-traducionais relacionadas a diversos processos celulares, foram descrito como importantes preditores de prognóstico em pacientes com tumores sólidos, embora pouco se saiba do seu impacto clínico na LMA. Este trabalho teve como objetivo avaliar a expressão dos genes PARP1, PARP2 e PARP3 e seu impacto nos desfechos clínicos de paciente adultos com LMA. Ao todo, 3 coortes independentes foram analisadas (Recife: 81 pacientes, TCGA: 173 pacientes e GSE6891: 245). Na coorte de TCGA e GSE, a expressão de PARP2 e PARP3 foi maior em pacientes com cariótipo complexo (p<0,001) e risco desfavorável (p<0,001). Além disso, a expressão aberrante de PARP2/3 teve impacto direto na sobrevida dos pacientes (PARP2, coortes TCGA (p=0,036) e GSE (p=0,006); PARP3, coortes TCGA (p=0,003) e GSE (p=0,001). A exemplo de tumores sólidos,
a expressão aberrante de PARP2/3 pode predizer um pior desfecho em pacientes adultos com LMA.

Protozoários patogênicos do gênero Leishmania apresentam o controle da sua expressão gênica predominantemente pós-transcricional, onde diferentes proteínas de ligação ao RNA parecem atuar, como a proteína de ligação à cauda poli-A (PABP). Três homólogos de PABP apresentando elementos típicos destas proteínas foram descritos em Leishmania, com uma região N-terminal com quatro domínios de reconhecimento de RNA (RRMs), uma região de ligação e um domínio MLLE C-terminal. Este estudo objetivou melhor compreender a atividade da PABP1, ativa na tradução dos mRNAs e outros processos. A PABP1 associa-se a mRNAs específicos e ao complexo eIF4F constituído por EIF4E4 e EIF4G3. Mutantes nos RRMs 1 e 2, na região de ligação e no domínio MLLE foram obtidos previamente e identificados como importantes para a função da PABP1. Nesse trabalho, mutantes nos RRMs 3 e 4 foram gerados e avaliados quanto ao seu potencial de complementar a ausência da PABP1 nativa em Leishmania infantum, levando a identificação do motivo MLN, no RRM4, como crítico para a atividade da proteína. Para a PABP1 nativa ensaios de co-precipitação seguidos de análise por espectrometria de massa permitiram definir a sua interação com diferentes parceiros. Novos ensaios com as proteínas mutantes definiram os motivos LMW (RRM2), MLN e TGM (MLLE) como essenciais para a co-precipitação com os EIF4G3, EIF4E4 e a quinase CRK3, respectivamente, entre outros. Estes resultados são uma contribuição significativa no entendimento das funções da PABP1

Para o Estado de Pernambuco existe uma sub-representação em estudos genético-populacionais com marcadores Y-STRs, bem como no banco de dados mundial YHRD, sabidamente referência para diversas análises. Esse fato, somado à importância antropológica em apresentar detalhes da história populacional local,
justificam o presente trabalho, que objetivou caracterizar as linhagens paternas e fornecer dados de interesse forense local para uma amostra da população de Pernambuco, por meio de um conjunto de 23 marcadores microssatélites do cromossomo Y (Y-STRs). Para este fim, 172 amostras masculinas oriundas de três mesorregiões do interior do estado foram coletadas e genotipadas utilizando o sistema multiplex PowerPlex ®Y23 (Promega Corporation). Os parâmetros forenses de frequências alélicas (FA), frequências haplotípicas (FH), diversidade gênica (DG), diversidade haplotípica (DH), capacidade de discriminação (CD) e probabilidade de coincidência haplotípica (PCH) foram calculados utilizando o programa Arlequin 3.5.2.2, bem como as comparações de distância genética pelo índice Fst, e a inferência dos haplogrupos foi realizada através da plataforma online Haplogroup predictor – HAPEST. Os dados obtidos para os parâmetros analisados revelarm uma alta diversidade gênica para os loci presentes, alta capacidade de discriminar haplótipos entre indivíduos aleatórios na população e baixa probabilidade de coincidir um mesmo haplótipo para dois indivíduos não aparentados, a inferência de haplogrupos baseada em haplótipos dos Y-STRs corroborou com a estrutura de patrilinhagens indicada para os demais estados brasileiros, com predominância daquelas europeias, sendo condizente com a história local de ocupação humana, ao passo que as distâncias genéticas foram menores para populações europeias e americanas, e maiores para as africanas.

A transmissão vertical do HIV-1 ocorre durante a gravidez, parto e/ou amamentação. No entanto, a maioria das crianças, mesmo expostas ao HIV-1, não são infectadas, sugerindo a presença de fatores de restrição limitando a infecção viral. Estudos demonstram que SNPs nos genes dos fatores de restrição TRIM5 e TRIM22 possuem impacto funcional, restringindo a replicação viral e modulando a suscetibilidade à infecção pelo HIV-1. Neste sentido, avaliamos as distribuições dos SNPs em TRIM5 (rs3740996/rs10838525) e TRIM22 (rs7935564/ rs1063303) e as suas relações com a transmissão vertical do HIV-1. O estudo envolveu 208 mulheres infectadas pelo HIV-1 e seus filhos, oriundos do Estado de Pernambuco. Através da caracterização clínica da população, foi verificado que a TARV durante a gestação e/ou parto, o parto cesáreo, a inibição da amamentação e a carga viral indetectável no final da gestação foram fundamentais na profilaxia da infecção em crianças expostas ao HIV-1 e devem ser ampliadas. Os alelos e genótipos G e GG (rs3740996), C e CC (rs10838525), A e A/G (rs7935564) e G e C/G (rs1063303) foram os mais frequentes entre as crianças expostas infectadas e não-infectadas, bem como entre as mães transmissoras e não transmissoras. Apesar de não encontrarmos associações significativas, o estudo foi pioneiro em abordar tais polimorfismos em uma população pediátrica exposta ao HIV-1. Novos estudos devem ser realizados para melhor compreensão da relação dessas variantes com a susceptibilidade ao HIV-1.

Dentre as diversas culturas vegetais mais produzidas no Brasil, destacam-se a uva (Vitis vinifera L.) e o feijão-caupi (Vigna unguiculata L.) com elevados índices de produção anual, apresentando relevante importância social e econômica. Entretanto, a produtividade dessas culturas é frequentemente afetada, devido à ocorrência de estresses. Nesse contexto, as modificações epigenéticas compreendem ampla funcionalidade, sendo os processos de (de) metilação de DNA, (de) metilação das histonas e (de) acetilação das histonas participantes diretos no mecanismo de combate ao estresse (a) biótico. Esses processos são desenvolvidos pelas enzimas metiltransferases (MTases) e demetilases (dMTases) de DNA; metiltransferase (SDGs) e demetilases (JMJs) de histonas; e acetiltransferases (HATs) e desacetilases (HDACs) de histonas. O presente trabalho teve como objetivo analisar essas enzimas mediante abordagens genômica e transcriptômica. Essas enzimas foram analisadas considerando suas características estruturais, distribuição genômica, mecanismos de expansão genômica, conservação entre outras espécies vegetais, além dos padrões de expressão frente a estresse biótico e abiótico. Bibliotecas de RNA-Seq de acessos contrastantes da videira [genótipo resistentes (IAC-572) e suscetível (Red Globe)] so estresse biótico, bem como bibliotecas de RNA-Seq de feijão-caupi sob estresse biótico (injúria mecânica seguida de inoculação viral) e abiótico (desidratação radicular) foram analisadas. As enzimas identificadas no genoma da videira (MTases e dMTases) e do feijão-caupi (SDGs, JMJs, HATs e HDACs) apresentaram, em sua maioria, conservação de suas respectivas estruturas. Além disso, um alto índice de conservação dessas enzimas foi observado nos genomas de diferentes espécies vegetais. Os elementos cis-regulatórios identificados nos promotores foram associados a diferentes TFs que estão intimamente relacionados a resposta vegetal a condições adversas. Os dados de expressão gênica para os acessos contrastantes da videira indicaram que os transcritos induzidos podem auxiliar em uma estratégia molecular no genótipo resistente da videira analisado nesse estudo. Uma vez que, uma maior indução de modificadores epigenéticos foi observada nesse genótipo quando comparado ao genótipo suscetível. Os dados de RNA-Seq do feijão-caupi apontam para uma maior indução de modificadores epigenéticos na resposta a desidratação radicular quando comparada ao ensaio de injúria mecânica seguida de inoculação viral. Em suma, os resultados gerados nesse estudo agregam valor ao entendimento da dinâmica desses modificadores epigenéticos na resposta de vegetais a estresse, evidenciando sua pluralidade estrutural e funcional.

Dípteros necrófagos são frequentemente encontrados em locais de crime, sendo úteis, principalmente às formas imaturas, nos processos de estimativa do intervalo pós-morte e de identificação de vítimas e suspeitos. A identificação taxonômica dos espécimes é uma etapa crucial na rotina forense, a qual vem sendo facilitada graças ao uso de técnicas de biologia molecular. Utilizar marcadores moleculares robustos e conhecer a estrutura genética destas espécies é de suma importância para a eficácia das atividades periciais. O presente trabalho objetivou comparar dois marcadores moleculares mitocondriais úteis para a técnica barcode em dípteros de interesse forense e investigar a diversidade genética da espécie Chrysomya albiceps de populações de quatro continentes. Dípteros foram coletados nas dependências dos Institutos de Medicina Legal da Paraíba e Pernambuco e adicionalmente foram utilizadas amostras da coleção entomológica da Universidade de Brasília. A extração do DNA ocorreu utilizando fenol-clorofórmio e Chelex 10%, em seguida foram sequenciadas as regiões COI e CytB dos dípteros, realizada buscas por sequencias homologas no NCBI através de BLASTn e uma análise de distância genética foi executada no software MEGA. Por sua vez, a análise de diversidade genética da espécie C. albiceps ocorreu a partir de sequencias nucleotídicas da região barcode do COI obtidas no NCBI e analisadas nos softwares Mega, DnaSP e Network. Os resultados da identificação de dípteros mostram que a região do CytB proposta como barcode revelou-se mais robusta, apresentado valores de distância genética superiores aos do COI e que a espécie C. albiceps apresenta baixa diversidade genética e ausência de haplótipos exclusivos na América do Sul. Desta forma, concluímos que COI e CytB são boas regiões para a taxonomia molecular, no entanto o CytB é mais robusto e que a espécie C. albiceps possui pouca diversidade no gene COI, não sendo recomendada para analises de deslocamento de cadáveres.

A infecção por Zika vírus é associada a graves malformações fetais e complicações neurológicas em adultos, representando risco à saúde pública. No entanto, ainda não existem vacinas licenciadas para uso humano. Vacinas de DNA são plataformas altamente adaptáveis, eficientes, seguras e possuem rápida produção e bom custo-benefício, sendo opções interessantes para o desenvolvimento de estratégias vacinais. Neste trabalho, desenvolvemos dois candidatos a vacina de DNA contra o ZIKV, e avaliamos a imunogenicidade destes em ensaios com camundongos Balb/c. Para isso, foram utilizados 14 epítopos presentes nas proteínas do Envelope e NS1, preditos in silico como indutores de respostas mediadas por células T e B. Adicionamos o peptídeo sinal ssPGIP a um dos candidatos, como estratégia de otimização da imunogenicidade vacinal. As sequências foram clonadas no vetor de pVAX1 para expressão em mamíferos e utilizadas para a imunização dos camundongos. Após 21 dias, o período de imunização foi encerrado, o sangue e o baço dos animais foram coletados para análises bioquímicas, hematológicas e imunológicas. Até o presente momento, temos indícios que as duas vacinas de DNA testadas, pVAX_EnvNS1 e pVAX_ssEnvNS1, foram capazes de ativar linfócitos T CD4+ e T CD8+, bem como gerar resposta imune humoral de perfil Th1.  Os dados obtidos indicam que a imunização com pVAX_ssEnvNS1 resulta em perfil polifuncional de produção de citocinas Th1, Th2 e Th17. Enquanto que a ativação de células T CD4+ e CD8+ observada para pVAX_EnvNS1 foi mais robusta e persistente.

A COVID-19 causada pelo SARS-CoV-2, disseminou-se mundialmente desde o seu primeiro registro no final de 2019 em Wuhan, China, sendo declarada como uma pandemia pela OMS. O SARS-CoV-2 infecta humanos e é altamente transmissível a partir do contato direto com pessoas infectadas, ou por contato indireto através de superfícies contaminadas. Atualmente, a técnica padrão-ouro para diagnóstico do SARS-CoV-2 é a RT-qPCR, porém por apresentar limitações, alguns métodos alternativos estão sendo explorados. Devido a sua sensibilidade, versatilidade, robustez e baixo custo, a técnica RT-LAMP tem sido aplicada para a detecção do SARS-CoV-2. Diante do exposto, este estudo teve por objetivo avaliar as medidas mais eficazes para controlar a pandemia da COVID-19, desde a análise da transmissibilidade em áreas urbanas públicas, até o desenvolvimento de uma plataforma diagnóstica baseada em RT-LAMP para detecção do SARS-CoV-2 em amostras humanas. Um total de 400 amostras de superfícies foram coletadas em fevereiro de 2021 no Recife, 24.2% foram positivas para o SARS-CoV-2 por RT-qPCR e 97.4% dos locais de coleta apresentaram pelo menos uma amostra de superfície contaminada. Em paralelo, ensaios RT-LAMP para detecção do SARS-CoV-2 foram conduzidos para padronização da técnica, avaliação da sensibilidade e especificidade, assim como validação clínica com 317 amostras humanas coletadas entre 2020 e 2021. O ensaio RT-LAMP apresentou elevada sensibilidade (~ 95%) e detectou o SARS-CoV-2 a partir de 15 minutos, sem necessidade de extração de RNA. O desempenho diagnóstico foi similar a RT-qPCR porém com otimização do tempo e custo cerca de 40x menor. Os dados apresentados fornecem informações quanto a dispersão do SARS-CoV-2 em Recife, cidade muito afetada pela COVID-19 e demonstra os pontos de controle críticos para interrupção da cadeia de transmissão do SARS-CoV-2. Além disso, visando controlar a pandemia em curso a partir da testagem em massa, a plataforma diagnóstica aqui desenvolvida servirá para aplicação em ponto de atendimento, especialmente em áreas com pouco recursos. 

As plantas medicinais são utilizadas por diferentes comunidades tradicionais de forma empírica, sendo necessários testes científicos que avaliem suas propriedades tóxicas e a eficácia das atividades biológicas. Tais informações contribuem para fomentar a fitoterapia no Sistema Único de Saúde (SUS) do Brasil na atenção primária. No presente trabalho, extratos aquosos das cascas do tronco de Commiphora leptophloeos (Mart.) J.B.Gillett (Burseraceae) e de Anadenanthera colubrina var. cebil (Griseb.) Altschul foram avaliados quanto aos potenciais antioxidante, citotóxico, genotóxico e antigenotóxico. Os metabólitos secundários das cascas secas de cada espécie foram extraídos por decocção e em seguida liofilizados. Para avaliar o potencial antioxidante foram utilizados os testes DPPH, ABTS, fosfomolibdênio e poder redutor em 8 concentrações, variando de 0,7839 a 100 μg/mL. Os valores de CE50 variaram de 5,43 a 35,20 μg/mL para C. leptophloeos e de 4,45 a 42,15 μg/mL para A. colubrina var. cebil. As células de fibroblastos de murinos (L929) foram empregados para avaliar a citoxicicidade, genotoxicidade e antigenotoxicidade. Na avaliação da citotoxicidade, nenhuma das concentrações utilizadas (13 concentrações variando entre 1,56 e 6400 μg/mL) alterou a viabilidade celular para os extratos de ambas as espécies. Adicionalmente, nenhuma das concentrações avaliadas (6,25, 25, 100 e 400 μg/mL) apresentou genotoxicidade para ambas as espécies avaliadas. Com relação à antigenotoxicidade, apenas as cascas de A. colubrina var. cebil foram avaliadas (200 μg/mL), observando-se ausência de antigenotoxicidade contra o metil metanossulfonato. A mutagenicidade foi avaliada pelo teste de mutação reversa usando duas cepas Salmonella typhimurium. Nenhuma das concentrações (6,25; 25; 100; 400 e 1600 μg/placa) para ambas as cepas avaliadas induziu aumento de revertentes causando mutagenicidade. A avaliação fitoquímica por CLAE/EM das cascas de C. leptophloeos revelaram que a classe dos flavonoides, principalmente do tipo epicatequina, foi a mais abundante e provalmente contribuiu com os resultados observados. Dessa forma, sugere-se que o extrato aquoso das cascas de C. leptophloeos e de A. colubrina var. cebil apresentam potencial antioxidante promissor com ausência de citogenotoxicidade e de mutagenicidade para os testes realizados.

Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista capaz de infectar pacientes queimados ou imunocomprometidos em hospitais e ambientes de assistência à saúde. Uma das principais causas de infeções hospitalares causadas por P. aeruginosa é devido a sua resistência intrínseca aos antimicrobianos e produção de biofilme. O sistema CRISPR/Cas é definido como um mecanismo de defesa de procariotos contra elementos genéticos móveis (MGEs), composto por um loco CRISPR, formado por sequências repetitivas intercaladas por espaçadores e genes cas. O trabalho teve como objetivo uma análise de isolados de P. aeruginosa comportando o sistema CRISPR/Cas. Dos 12 isolados analisados, 83% abrigam o sistema tipo I-F e 17% o sistema tipo I-E. Apesar de existirem outros tipos de sistema CRISPR em P. aeruginosa, o tipo I-F é o mais encontrado nos isolados. Os espaçadores encontrados para o tipo I-F correspondem a sequências de bacteriófagos e plasmídeos, corroborando com o princípio de funcionamento do sistema CRISPR/Cas. Foi observado a presença de genes anti-CRISPR e profagos inseridos nos genomas desses isolados. A presença dos STs compartilhados entre setores e entre hospitais permitiu traçar uma rota de disseminação desses isolados. Entretanto, a aplicação do loco CRISPR como uma ferramenta molecular para tipagem, se mostrou ineficaz em P. aeruginosa. Nossos resultados fornecem informações sobre a genética básica estrutural do loco CRISPR, o que vem a contribuir com a geração de conhecimentos sobre o sistema CRISPR/Cas em P. aeruginosa.

O feijão-caupi representa a principal leguminosa cultivada nas regiões Norte e Nordeste, e como as demais  é fortemente afetada pelo déficit hídrico. Frente a tal estresse, os fitohormônios atuam como sinalizadores, promovendo respostas específicas às plantas. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a expressão de genes de V. unguiculata, envolvidos nas vias de sinalização de fitohormônios, após a exposição das raízes ao ar (150 min.). Para tanto, unitags HT-SuperSAGE de feijão-caupi, provenientes de dois cultivares diferentes em resposta à seca, foram associadas (BlastN) a transcritos de feijão-caupi das vias de sinalização por auxina, citocinina giberelina, ácido abscísico, etileno, jasmonato, brassinoesteróides, ácido salicílico e estrigolactonas. Dos 630 transcritos previstos nas vias, 260 foram diferencialmente expressos (DE, p <0,05) após o estímulo aplicado. No perfil PO (cultivar tolerante Pingo de Ouro), transcritos UR (induzidos), DR (reprimidos) e n.s. foram, respectivamente, 146, 35 e 78. No perfil sensível SI (Santo Inácio), estes foram 81, 80 e 99. Fatores de transcrição potencialmente regulando genes cujos transcritos foram UR também foram previstos, assim como os interatomas associados aos transcritos UR das respostas individuais. A partir dos resultados, 17 pares de primers para RT-qPCR foram propostos, visando o desenvolvimento de marcadores funcionais baseados em cDNAs. Os resultados contribuem para uma melhor compreensão das vias de sinalização dos fitohormônios nas respostas do feijão-caupi, face a um estresse de seca, podendo ser úteis aos programas de melhoramento genético, na busca de materiais mais adaptados a este estresse, o qual compromete nossas produções.

     O câncer do colo do útero tem como o principal agente etiológico o Papilomavírus Humano (HPV), envolvido em lesões benignas cutâneas e de mucosas. Alguns HPVs apresentam potencial carcinogênico e as lesões associadas
podem evoluir para o câncer. Atualmente estão disponíveis três vacinas profiláticas aprovadas e comercializadas, e embora contemplem diversos tipos virais, não são capazes de tratar tumores existentes ou que possam vir a se desenvolver em pacientes já infectados. O presente projeto buscou desenvolver estratégia terapêutica para o câncer do colo do útero baseado em vacina de DNA contendo epítopos da oncoproteína E5 do HPV16. Os epítopos de E5 adicionados à estratégia são capazes de induzir a resposta imune celular com perfil de células T citotóxicas. E5 é expressa nas fases iniciais da infecção, tornando-a atrativa para terapias vacinais que visam às fases iniciais da transformação tumoral. Para tal, avaliamos in vivo a expressão dos respectivos antígenos e in vitro a partir de esplenócitos dos camundongos imunizados. Analisamos a resposta imune celular adaptativa e de citocinas secretadas por camundongos previamente desafiados com células tumorais C3. Também avaliamos o estresse oxidativo e os níveis toxicológicos induzidos pelo tratamento em modelo animal. Os resultados assinalam a capacidade da vacina proposta em ativar células T citotóxicas e a secreção equilibrada das citocinas Th1, Th2 e Th17. A vacina pVAXE5m foi capaz de associar regressão tumoral associada a bons indicadores toxicológicos.

O câncer cervical é quarta neoplasia mais prevalente em mulheres no mundo. Além disso, os cânceres associados à infecção pelo papilomavírus humano (HPV) incluem desde lesões neoplásicas anogenitais até orofaríngeas. A atividade da proteína E7 produzida por HPV de alto risco é apontada como uma das principais mediadoras da carcinogênese. O presente estudo objetivou desenvolver estratégias terapêuticas contra lesões associadas à infecção pelo HPV-16 através da elicitação de resposta imune contra epítopos imunogênicos da proteína E7 do HPV-16, em modelo pré-clínico. Como adjuvante vacinal foram utilizados o imunomodulador Ii-PADRE e sequências linkers. Quanto a confecção da vacina de DNA, os genes de interesse foram clonados no vetor pVAX. Camundongos C57 black foram desafiados com a linhagem tumoral C3, seguido de imunização em esquema prime-boost homólogo e eletroporação. A avaliação dos efeitos antitumorais foi realizada através da investigação de citocinas presentes no soro e nos tumores, além da pesagem, monitoramento do crescimento, e análise histopatológica dos tumores. Nossos dados não revelaram diferença estatística entre os grupos, porém é possível observar uma tendência para o aumento de citocinas Th1, menor densidade tumoral, e menor pleomorfismo em tumores de animais imunizados com o plasmídeo multi E7 associado ao Ii-PADRE, o que pode indicar um possível potencial imunogênico desta estratégia vacinal para a indução da resposta celular protetiva. Além disso, melhorias na construção vacinal E7 se fazem necessárias para obtenção de uma melhor performance.

A capacidade de a levedura Brettanomyces bruxellensis utilizar diferentes fontes de carbono é um dos fatores associados à sua alta adaptação aos ambientes industriais. Assim, o presente trabalho teve como objetivo investigar a potencial aplicação de B. bruxellensis na fermentação alcoólica, avaliando aspectos fisiológicos e genéticos do metabolismo de açúcares utilizados como substratos nesse processo industrial. Para isso, realizamos uma triagem com diferentes isolados de vinho e etanol em sete açúcares industrialmente relevantes. A capacidade de assimilar e fermentar xilose, arabinose e galactose, bem como a influência da glicose no metabolismo dessas fontes de carbono também foi estudada. Nossos resultados mostraram a ampla diversidade de assimilação de açúcares em B. bruxellensis. Adicionalmente, foi observado que o efeito repressor da glicose é menos estrito em linhagens de etanol do que em linhagens de vinho. Em ensaios com xilose e arabinose, ambas as pentoses foram convertidas a biomassa quando em aerobiose. Em limitação de oxigênio, houve produção de etanol a partir de xilose, ao passo que a arabinose não foi utilizada. Análises de expressão gênica mostraram que a glicose não exerceu efeito repressor na linhagem JP19M. Finalmente, foi observado que JP19M é capaz de fermentar galactose e consumir simultaneamente glicose e galactose, apresentando metabolismo respiro-fermentativo. Em conjunto, nossos resultados mostram que a linhagem JP19M apresenta características relevantes para uma possível aplicação
na produção de etanol a partir açúcares encontrados em hidrolisados lignocelulósicos.

A Terapia Antirretroviral objetiva diminuir a carga viral plasmática e, consequentemente, reconstituir as células T CD4+. Entretanto, entre 15 a 30% dos indivíduos que atingem o sucesso virológico, não se recuperam imunologicamente, condição chamada falha imunológica. Alguns fatores são investigados como causa, dentre eles, a baixa produção de linfócitos T CD4+, processo esse influenciado pela atividade de citocinas, como a IL-10. Alterações na expressão e nos níveis plasmáticos da IL-10 podem estar relacionados à ineficiência da recuperação imunológica. Nesse contexto, a presença de polimorfismos na região promotora do gene IL10, pode influenciar nesse processo. Sendo assim, o estudo objetivou avaliar a influência da IL-10 na falha imunológica de indivíduos vivendo com HIV-1 em TARV. A dosagem sérica da IL-10 foi realizada por citometria (CBA), enquanto a genotipagem dos SNPs ocorreu através de sondas Taqman por PCR em Tempo Real. Foi realizado também o ensaio de quantificação relativa da expressão do gene IL10 por meio do Ct comparativo. Como gene de referência utilizou-se o GAPDH. Com relação à dosagem sérica, não houve diferença significativa entre os grupos IR e INR. O mesmo foi encontrado na genotipagem, onde os genótipos mostraram não interferir nos níveis plasmáticos da IL-10. Já no ensaio de expressão, observouse que o gene IL10 está 3,77 vezes mais expresso no grupo INR comparado ao
IR. Sendo assim, mais avaliações são necessárias para compreensão do processo da falha imunológica