Peptídeos antimicrobianos de Stylosanthes scabra: Prospecção in silico, expressão e produção de proteínas recombinantes
A crescente resistência antimicrobiana desafia os sistemas públicos de saúde, exigindo estratégias inovadoras para a descoberta de novos compostos terapêuticos. A prospecção in silico de peptídeos antimicrobianos (AMPs) em genoma de plantas e o uso desses compostos para o design racional de peptídeos menores (RAMPs) surgiram como alternativas promissoras. Entre as espécies vegetais nativas do Brasil, a Stylosanthes scabra se destaca pelo valor de seus genes de sobrevivência a ambientes desafiadores, como a Caatinga. Assim, o presente trabalho teve como objetivo identificar (in silico) duas classes de AMPs – defensinas e peptídeos hevein-like – em S. scabra, utilizá-los no desenho racional de peptídeos e, então, produzi-los em sistema heterólogo. As sequências candidatas foram mineradas e analisadas através de ferramentas como Modeller 10.0 e AlphaFold 2/ColabFold, assim como a estabilidade dos modelos foi avaliada por dinâmica molecular (100ns, GROMACS 5.0.7). Em paralelo, foram realizados experimentos para análise de expressão diferencial de S. scabra após infecção do fungo Macrophomina pseudophaseolina. Por fim, foram realizados designs de RAMPs e avaliação de suas conformações estruturais. Nesse estudo, foram identificadas 10 defensinas (SsDefs) e 13 heveínas (SsHevs), cujos modelos demonstraram estabilidade nas simulações. A partir delas, foram criados 20 RAMPs que apresentaram modificações iniciais em sua estrutura até que fosse alcançada uma conformação estável. Esses resultados destacam a S. scabra como uma fonte promissora de AMPs, que são base para desenvolvimento de RAMPs potenciais para aplicações em saúde e na agropecuária. As próximas etapas do trabalho consistem em realizar as análises de expressão diferencial e produção de RAMP em sistema heterólogo.