Banca de QUALIFICAÇÃO: KARINA MAYUMI TANI BEZERRA DE MELO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: KARINA MAYUMI TANI BEZERRA DE MELO
DATA : 01/12/2025
LOCAL: SALA DE AULA DO LABORATÓRIO CENTRAL
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE SISTEMA DE ENTREGA PARA RNA DE INTERFERÊNCIA UTILIZANDO Pichia pastoris COMO VETOR PARA MODULAÇÃO DE MACRÓFAGOS ASSOCIADOS AO TUMOR

PALAVRAS-CHAVES:

Medicina de precisão. Silenciamento gênico. Estratégias de delivery.

PÁGINAS: 57
RESUMO:

No Brasil, o câncer cervical é o quarto tipo de câncer mais prevalente nas mulheres, sendo considerado um problema de saúde pública. Apesar da disponibilidade de vacinas profiláticas para o Papilomavírus Humano (HPV), o principal agente infeccioso do câncer cervical, e a sua contribuição para uma redução significativa na taxa de incidência da patologia, ela não beneficia pacientes com o tumor já estabelecido. A cirurgia e a radioterapia, os principais tratamentos vigentes, seguidos da quimioterapia, também apresentam certas limitações. Assim, terapias alternativas são necessárias para melhorar o controle da doença e a sobrevida dos pacientes em diferentes estágios, podendo atuar de forma combinada aos tratamentos vigentes. Os principais alvos para as abordagem alternativas são direcionados para a modulação da resposta antitumoral, considerando os componentes do microambiente tumoral, como os macrófagos associados aos tumores com perfil imunossupressivo (M2). A modulação da expressão gênica através de RNA de interferência (RNAi) tem mostrado uma estratégia promissora no tratamento do câncer cervical. Entretanto, uma das dificuldades para estabelecer abordagens de imunomodulação é a garantia de um delivery específico para as células adequadas. Leveduras têm se mostrado carreadores interessantes devido a sua interação com receptores de macrófagos e células dendríticas, e tem emergido como potenciais vetores para carreamento de DNA, RNAm e RNAi. Desse modo, esse projeto propõe o desenvolvimento de um produto de terapia gênica a partir do uso da levedura Pichia pastoris como sistema de carreamento para RNAi, tendo como alvo o receptor do fator estimulante de colônias de macrófagos 1 (CSF1R) para modular a expressão de macrófagos M2, visando induzir um perfil antitumoral nos macrófagos associados a tumores HPV-positivos. Para isso, diferentes sequências de short hairpin RNA (shRNA) foram selecionadas, tendo como alvo a sequência do CSF1R de Mus musculus de acordo com o seu potencial de se ligar ao RNAm e de não interferir na expressão de outros genes. Assim, sequências foram amplificadas, digeridas e inseridas no vetor de expressão pLT-hU6-miR30, para posteriormente, serem inseridas na levedura P. pastoris através da eletroporação. Além disso, um vetor, o pEGFP-mCSF1R, foi construído para verificação da modulação da expressão do CSF1R através da fluorescência do gene da GFP (Green Fluorescent Protein), mas também através de RTq-PCR e Western Blot. Posteriormente, serão feitos ensaios in vitro para verificação da modulação do perfil de macrófagos em células RAW-264.7, bem como avaliar a toxicidade desse sistema nas células. Assim, espera-se a construção de um vetor de expressão capaz de modular a expressão do CSF1R, bem como o perfil de macrófagos (M2/M1) in vitro. Adicionalmente, espera-se a inserção dos vetores de expressão em leveduras, e o seu direcionamento para macrófagos M2.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2067264 - WILL DE BARROS PITA
Externo ao Programa - ***.246.184-** - PEDRO LUIZ DE FRANCA NETO - UFPE
Externa à Instituição - ADALUCIA DA SILVA