Banca de DEFESA: FELYPE THOMAZ DE BRITO ROCHA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: FELYPE THOMAZ DE BRITO ROCHA
DATA : 31/01/2023
HORA: 14:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

BIOPROSPECÇÃO DE Aspergillus sp. PRODUTOR DE: PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO

 

 

PALAVRAS-CHAVES:

Aspergillus sp., Fermentação em estado sólido, protease, resíduos agroindustriais

PÁGINAS: 72
RESUMO:

Proteases são enzimas que hidrolisam ligações peptídicas e apresentam grande interesse industrial por catalisarem reações e consequentemente acelerarem a obtenção de produtos nas áreas Têxtil, alimentícia e farmacêutica. Devido a essa importância, faz-se necessário a utilização de novas fontes de obtenção e métodos em reduzir o custo de produção dessas enzimas. Pensando nisso, a utilização de resíduo agroindustrial em associação com processos fermentativos pode ser uma forma de obtenção de novas enzimas. O presente trabalho teve como objetivo utilizar linhagens do fungo Aspergillus (A. sydowii e o A. serratalhadensis) para a produção de proteases através da técnica de fermentação em estado sólido (FES), bem como, purificar proteases através de processos cromatográficos e determinar as suas características físico-químicas. O processo de produção foi analisado através da análise dos parâmetros tempo, umidade e a concentração de substrato. A técnica de purificação utilizada incluiu precipitação cetônica e colunas cromatográficas contendo resina de DEAE-Sephadex e Superdex 75. Os resultados da fermentação com o A. sydowii demonstraram que o extrato bruto apresentou atividade proteolítica de 412 U/mL, sendo fortemente inibida por PMSF, cerca de 85%, e ativada pelo o íon Fe+3 (cerca de 69%). A atividade ótima foi observada em pH 8 a 45°C, com estabilidade térmica do extrato entre 25°C e 45°C, mantendo 85% de sua atividade inicial. Após caracterização do extrato bruto (EB), uma protease foi purificada com rendimento de 5,9 vezes maior que o EB, recuperação de 53% e a atividade proteolítica de 256 U/mL. A enzima apresentou tamanho de aproximadamente 48 KDa e apresentou inibição por PMSF (60%), porém com ativação enzimática através do íon Cu+2 (56,5%). A atividade ótima foi observada em pH 8,0 a 45°C, com estabilidade da enzima entre 35°C e 50°C, mantendo 70% de sua atividade inicial. Com o A. serratalhadensis o EB apresentou atividade proteolítica de 1066 U/mL, tendo uma inibição de pelo íon Zn+2 (ZnSO4) de 49,5% e o íon Na+ (NaCl) e K+ (KCl) aumentaram a atividade em 11,9% e 19,1% respectivamente. A atividade ótima foi encontrada em pH 6 a 35°C, com estabilidade térmica do extrato entre 25 °C e 55°C, mantendo 75 % de sua atividade inicial. A protease purificada apresentou atividade proteolítica de 211 U/mL e atividade específica de 347 U/mg. As linhagens isoladas de A. sydowii e de A. serratalhadensis foram eficazes para a produção de protease com potencial biotecnológico através da FES utilizando o substrato café, além de uma possível solução para o dano ambiental provocado pelo resíduo utilizado.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - ***.147.764-** - ANA LUCIA FIGUEIREDO PORTO - UFRPE
Externa à Instituição - CAROLINA DE ALBUQUERQUE LIMA DUARTE - UPE
Externa à Instituição - MARIA TACIANA CAVALCANTI VIEIRA SOARES - UFRPE
Externa à Instituição - RAQUEL PEDROSA BEZERRA - UFRPE
Interno - ***.993.114-** - ROMERO MARCOS PEDROSA BRANDAO COSTA - UFRPE