Banca de QUALIFICAÇÃO: JOSE NOE DA SILVA JUNIOR

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JOSE NOE DA SILVA JUNIOR
DATA : 25/11/2022
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

Atividade tripanocida e imunomoduladora de proteínas obtidas de microrganismos fotossintetizantes

PALAVRAS-CHAVES:

Microalgas, doença de Chagas, proteína, imunomodulação

PÁGINAS: 70
RESUMO:

Atualmente, duas medicações estão disponíveis na terapia antichagásica. São elas o benznidazol e nifurtimox. Esses fármacos, no entanto, são tóxicos, pouco eficazes em pacientes crônicos, e também são alvos de resistência por parte do Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença. Diante da necessidade de novas fontes para obtenção de compostos seletivos contra T. cruzi, microalgas ganham destaque devido à facilidade de cultivo e obtenção de biomassa; composição bioquímica, que é predominantemente proteica em espécies como Chlorella vulgaris e Tetradesmus obliquus; assim como a diversidade de aplicações biológicas descritas na literatura, incluindo ativiade antiparasitária. Neste trabalho, foram descritas a ação anti-T. cruzi dos extratos aquosos de C. vulgaris e T. obliquus. Por outro lado, uma nova proteína com ação tripanocida foi purificada a partir do extrato aquoso de T. obliquus. Inicialmente, as microalgas foram cultivadas na presença de CO2, luz e minerias, sendo a biomassa obtida durante a fase exponencial de crescimento por centrifugação. Já o extrato aquoso foi obtido por sonicação, utilizando Tris HCl (0,2 M e Ph = 7,2) como solvente. Os extratos de C. vulgaris e T. obliquus foram avaliados quanto aos seus efeitos citotóxicos em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e em formas tripomastigotas de T. cruzi. Nesse contexto, foram determinadas a concentração mínima letal para as células (CC50), assim como a concentração mínima inibitória do parasita (IC50) e o índice de seletividade de cada extrato. Em relação aos efeitos citotóxicos, ambos os extratos foram avaliados em intervalos de 24, 48 e 72 h. O extrato aquoso de C. vulgaris não comprometeu a viabilidade de PBMC nas concentrações avaliadas (1000 a 31,25 µg/ml), em nenhum dos intervalos, sendo a CC50 > 1000 µg/ml. Já o extrato de T. obliquus comprometeu 80% da viabilidade celular na maior concentração testada, que foi de 400 µg/ml, sendo a CC50 = 253,44 µg/ml. Em relação à atividade tripanocida, ambos os extratos foram eficazes contra formas tripomastigotas de T. cruzi, sendo a IC50 = 112,10 µg/ml e 15,02 µg/ml para C. vulgaris e T. obliquus, respectivamente. No entanto, o extrato aquoso de T. obliquus foi mais seletivo contra o parasita (ISe = 25). Uma nova proteína foi purificada a partir desse extrato, para avaliação de atividades citotóxica, tripanocida e na expressão das citocinas IL-2, IL-6, IL-10, IFN- e óxido nítrico (NO) em PBMCs infectadas por T. cruzi. A purificação proteica se deu por procedimentos sequenciais, que envolveram precipitação com sulfato de amônio em diferentes frações (0-20%, 40-60%, 60-80% e 80-100%), cromatografia de troca iônica e perfil eletroforético. Todas as frações proteicas obitdas pela precipitação com sulfato de amônio foram previamente dialisadas em tampão Tris HCl a 50 mM, pH 7,2, a 4ºC, por 27 horas, e avaliadas quanto à ação tripanocida. A fração entre 40 a 60% apresentou melhor atividade tripanocida, com inibição de 90% a 60 µg/ml, e foi submetida a purificação em coluna de troca aniônica, que foi DEAE Sephadex. Nesta etapa, foram obtidos dois picos, o primeiro eluído com tampão Tris HCl a 200 mM (pH 7,2) e o segundo, com o mesmo tampão, acrescido de 1M de NaCl. O primeiro pico apresentou concentração proteica de 117 µg/ml, enquanto o segundo foi de 124 µg/ml. Os compostos proteicos obtidos a partir de extrato aquoso de microalgas representam, portanto, uma alternativa viável na terapia antichagásica, devido ao baixo custo de produção, e alto índice de seletividade contra o parasita.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - ***.147.764-** - ANA LUCIA FIGUEIREDO PORTO - UFRPE
Externa à Instituição - RAQUEL PEDROSA BEZERRA - UFRPE
Interno - ***.993.114-** - ROMERO MARCOS PEDROSA BRANDAO COSTA - UFRPE