Banca de QUALIFICAÇÃO: VIVIANE DO NASCIMENTO E SILVA ALENCAR

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : VIVIANE DO NASCIMENTO E SILVA ALENCAR
DATA : 01/07/2021
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

Produção, Purificação, Caracterização e Aplicação de Proteases Fibrinolíticas Produzidas por Streptomyces parvulus DPUA 1573 e Aspergillus tamarii kita UCP 1279

PALAVRAS-CHAVES:

Enzima fibrinolítica; Streptomyces parvulus; Aspergillus tamarii; Fermentação; Extração.

PÁGINAS: 100
RESUMO:

A trombose se destaca como a principal causa subjacente do infarto agudo do
miocárdio, do acidente vascular cerebral e do tromboembolismo venoso. É
caracterizada pela formação ou desenvolvimento de um coágulo sanguíneo
responsável por causar a obstrução e inflamação na parede do vaso. Proteases com
atividades fibrinolíticas atuam na dissolução desses coágulos sanguíneos a partir
da “quebra”, por hidrólise, da molécula de fibrina. Devido a esse potencial das
enzimas fibrinolíticas, essas se tornaram alvos de diversas pesquisas. As enzimas
de origem microbianas se tornam muito interessantes, já que proporcionam fácil
manuseio, produtividade alta e baixo custo de produção. O objetivo desta pesquisa
foi a produção de proteases fibrinolíticas a partir de cepas de Streptomyces
parvulus DPUA 1573 e de Aspergillus tamarii Kita UCP1279, a recuperação
dessas proteases por sistema de duas fases aquosas e a caracterização bioquímica
parcial da enzima. O sistema de duas fases aquosas (SDFA) foi realizado de
acordo com um planejamento fatorial completo 2 4 usando a massa molar de
polietilenoglicol, concentração de polietilenoglicol, concentração de sais de
fosfato e pH como variáveis independentes. Foi analisado também o efeito de
diferentes íons, surfactantes, inibidores de protease, pH e temperatura na atividade
enzimática da protease fibrinolítica produzida pelo Streptomyces parvulus DPUA
1573. Como resultados preliminares, as melhores condições para purificação por
SDFA da enzima produzida pelo Streptomyces parvulus DPUA 1573 foram
17,5% de polietilenoglicol 8000, 15% de fosfato e pH 8,0, obtendo-se um
coeficiente de partição de 7,33, rendimento de 57,49% e fator de purificação de
2,10 vezes. Verificou-se um aumento da atividade enzimática na presença de Fe 2+
e diminuição na presença de β-Mercaptoetanol, fluoreto de fenilmetilsulfonila e
ácido iodoacético. O pH ótimo foi de 7,0 e a temperatura ótima foi de 40 ºC. Em
relação a protease fibrinolítica produzida pelo Aspergillus tamarii Kita UCP1279,
esta apresentou uma atividade fibrinolítica de 25,49 U/mL. O extrato bruto de
fermentação foi adicionado ao SDFA e as melhores condições para a purificação
da enzima foram obtidas com 12,5% de polietilenoglicol 8000, 15% de fosfato e
pH 8.0, obtendo-se um coeficiente de partição de 0,06, rendimento na fase sal de
487,2% e fator de purificação de 14,1. Como perspectivas futuras para o
desenvolvimento da pesquisa pretende-se determinar as condições mais adequadas
para purificação das enzimas fibrinolíticas por métodos cromatográficos;
caracterizar o perfil eletroforético e as atividades fibrinogenolítica e amidolítica
das enzimas purificadas, determinar os tempos de coagulação de sangue tratado
com as enzimas purificadas, avaliar a frequência de micronúcleos em eritrócitos
de sangue tratados com as enzimas purificadas e analisar a frequência de danos ao
DNA em células sanguíneas tratadas com as enzima purificadas.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - AMANDA EMMANUELLE SALES CONNIFF
Externo à Instituição - ROMERO MARCOS PEDROSA BRANDAO COSTA - UPE
Presidente - 434.970.803-06 - VALERIA PEREIRA HERNANDES - Fiocruz - PE