Banca de QUALIFICAÇÃO: LARISSA SILVA DE MACEDO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LARISSA SILVA DE MACEDO
DATA : 31/08/2022
LOCAL: presencial
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DE ESTRATÉGIAS VACINAIS PROFILÁTICAS APLICADAS AO CONTROLE DA INFECÇÃO PELO SARS-CoV-2

PALAVRAS-CHAVES:

Palavras-chave: Vacina. Pichia pastoris. Adjuvante. Ácidos nucléicos. COVID-19.

PÁGINAS: 110
RESUMO:

O SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus - 2) é considerado um dos vírus emergentes de importância mundial, representando risco à população humana como agente causador da doença do coronavírus 2019 (COVID-19). Embora, até o momento, exista vacinas consolidadas para uso emergencial em humanos contra essa infecção, outras abordagens continuam em desenvolvimento na busca por melhores profilaxias frente as diferentes variantes virais em surgimento e como medida de contenção da infecção. Dentre os antígenos alvo para vacinas, a proteína do nucleocapsídeo (N) é reconhecida como efetiva na indução da produção de anticorpos neutralizantes pelo hospedeiro atuando de maneira protetiva. Ademais, abordagens com base na predição de epitopos dominantes também se apresentam como estratégias promissoras, conhecidas como vacinas baseadas em antígenos sintéticos. Neste contexto, uma das principais leveduras utilizadas na construção de vacinas, é a Pichia pastoris, que permite a ancoragem e exposição de proteínas heterólogas em sua superfície, e também o carreamento antigênico de modo seguro. Além disso, P. pastoris possui atuação como adjuvante natural por apresentar propriedades imunoestimulatórias devido a sua estrutura celular, o que possibilita uma resposta imune potencializada por mecanismos de fagocitose ao antígeno-alvo apresentado. Desse modo, o presente estudo objetivou a elaboração de construções vacinais a partir da produção e ancoragem da proteína N e do antígeno sintético multiepítopo (com e sem adjuvantes) do SARS-CoV-2 em P. pastoris; e também a construção de vacinas de DNA com base nos mesmos antígenos da construção anterior, carreadas por P. pastoris. Os genes alvos foram digeridos e subclonados no vetor de expressão pPGK_Agα (para as estratégias de ancoragem de proteínas a levedura) e ao vetor  pVAX (para as vacinas de DNA carreadas por levedura). A inserção correta dos antígenos foi confirmada por meio de PCR e análise de restrição. As células de Pichia pastoris (GS115) foram transformadas com as construções para o vetor pPGK_Agα de modo integrativo no genoma da levedura. O transformante pPGKΔ3-Scov2-SintΔ_Agα foi analisado quanto a expressão da proteína por meio de Western-blot, demonstrando a banda correspondente a proteína de interesse. De maneira geral, o presente trabalho conseguiu obter construções vacinais para serem avaliadas como profilaxia contra COVID-19. Os demais experimentos para transformação na levedura, avaliação da expressão e ensaios pré-clínicos para as vacinas de DNA encontram-se em andamento.

 

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - FERNANDA CRISTINA BEZERRA LEITE
Externa à Instituição - ISABELLE FREIRE TABOSA VIANA
Presidente - 1061810 - VALESCA PANDOLFI