Banca de QUALIFICAÇÃO: SUELLEN PEDROSA DA SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : SUELLEN PEDROSA DA SILVA
DATA : 23/03/2022
LOCAL: Plataforma Google Meet
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DE ATIVIDADES BIOLÓGICAS E TOXICIDADE DE EXTRATO SALINO E LECTINA DE FOLHAS DE Portulaca elatior

PALAVRAS-CHAVES:

Portulaca elatior; lectina antimicrobiana; toxicidade; fotoproteção; atividade antioxidante; Candida; Pectobacterium.

PÁGINAS: 122
RESUMO:

A biodiversidade brasileira inclui uma gama de espécies vegetais que produzem moléculas com atividades antimicrobiana, antioxidante e fotoprotetora, entre outras. Essas propriedades estão diretamente relacionadas à presença de compostos bioativos, como metabólitos secundários, proteínas e polissacarídeos. Dentre as proteínas, destacam-se as lectinas, proteínas capazes de se ligar de forma seletiva e reversível a carboidratos, possuindo diversas atividades biológicas. O presente trabalho teve como objetivos avaliar atividades biológicas e a toxicidade de extratos salinos de folhas e caule de Portulaca elatior, bem como de uma lectina (PeLL) isolada de suas folhas. As folhas ou caules de P. elatior foram secos, triturados e homogeneizados em NaCl 0,15 M para obtenção dos extratos salinos, os quais foram submetidos à caracterização química por cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os extratos salinos foram avaliados quanto à atividade antioxidante pelos métodos de sequestro dos radicais DPPH e ABTS⁺ e determinação de capacidade antioxidante total (CAT), sendo determinados os valores de CI₅₀ (concentração responsável pela redução de 50% da presença do agente oxidante). A atividade fotoprotetora dos extratos foi mensurada por meio da determinação do fator de proteção solar (FPS) in vitro. Por fim, o extrato de folhas, com atividades biológicas mais significativas, foi selecionado para os testes de toxicidade in vivo (toxicidade aguda oral e toxicidade dérmica; 1000 e 2000 mg/kg) e in vitro (atividade hemolítica; 7,81–1.000 µg/mL). Para purificação de PeLL, o extrato de folhas foi submetido à cromatografia em coluna de quitina. PeLL foi então submetida a avaliações de sua atividade hemaglutinante (AH) na presença de íons, carboidratos e diferentes valores de pH e temperatura. Foram determinados ainda ponto isoelétrico (pI), massa molecular e estabilidade frente a agentes desnaturantes (por análises fluorimétricas). Por fim, PeLL foi avaliada quanto à atividade antimicrobiana contra espécies de Pectobacterium e Candida, toxicidade oral aguda in vivo (5 e 10 mg/kg) e atividade hemolítica. Os resultados mostraram que os extratos de folhas e caules de P. elatior possuem em sua composição fenóis, flavonoides, açúcares redutores, terpenos e esteroides. Na atividade antioxidante, o extrato de folhas demonstrou maior eficácia em capturar os radicais livres ABTS⁺ (CI₅₀: 34,15 µg/mL) e DPPH (CI₅₀: 55,44 µg/mL), bem como maior CAT (CI₅₀: 413,3 µg/mL) quando comparado ao extrato de caule (CI₅₀ de 628,80, 2.499 e 9.475 µg/mL nos ensaios de ABTS⁺, DPPH e CAT, respectivamente). Isso também foi observado para a atividade fotoprotetora, com o extrato de folhas apresentando FPS > 6 nas concentrações de 50 e 100 µg/mL, enquanto o extrato de caule apresentou FPS < 6 em todas as concentrações testadas. Os ensaios de toxicidade in vivo e in vitro apontaram que o extrato de folhas não causou alterações letais nos parâmetros fisiológicos, hematológicos e bioquímicos dos camundongos, bem como apresentou baixa ação hemolítica. No que concerne à purificação de PeLL, a cromatografia do extrato de folhas em coluna de quitina resultoi em um único pico de proteínas adsorvidas e eluídas com ácido acético. PeLL apresentou AH específica de 744,2 (fator de purificação de 1.695 vezes), uma única banda polipeptídica em eletroforerse para proteínas nativas ácidas, pI 5,4 e massa molecular de 20 kDa. A lectina teve sua AH inibida por manose, galactose, Ca²⁺, Mg²⁺ e Mn²⁺. A AH de PeLL se manteve estável mesmo diante do aquecimento a 100 °C, embora tenham sido detectadas alterações conformacionais através das análises fluorimétricas das amostras após aquecimento. PeLL apresentou AH mais expressiva na faixa de pH ácido (3,0–6,0). A lectina apresentou concentração mínima inibitória (CMI) e concentração mínima bactericida (CMB) de 0,185 e 0,74 μg/mL, respectivamente, para todas as cepas de Pectobacterium avaliadas. Além disso, PeLL apresentou CMI e concentração mínima fungicida (CMF) de 1,48 μg/mL para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei; e CMI e CMF de 0,74 e 2,96 μg/mL, respectivamente, para C. parapsilosis. Nenhuma atividade hemolítica in vitro ou sinais de toxicidade aguda in vivo em camundongos foram observados.

MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 3239642 - ALISSON MACARIO DE OLIVEIRA
Interna - 1526147 - MARCIA VANUSA DA SILVA
Presidente - 1133984 - PATRICIA MARIA GUEDES PAIVA