Banca de QUALIFICAÇÃO: WENNY CAMILLA DOS SANTOS ADAN

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: WENNY CAMILLA DOS SANTOS ADAN
DATA : 02/05/2023
LOCAL: Defesa remota
TÍTULO:

Produção e Caracterização de Proteínas Recombinantes Engenheiradas Computacionalmente Contra Epítopos Virais

PALAVRAS-CHAVES:

SARS-CoV-2. ZIKV. DENV. VHH. Proteína recombinante. Engenharia de proteínas.

PÁGINAS: 109
RESUMO:

Apenas no século XXI, ocorreram mais de dez grandes surtos virais, incluindo a epidemia de arbovírus no Brasil (2015) e a atual pandemia de COVID-19. A estimativa é que a emergência de doenças virais se acelere, destacando necessidade de abordagens proativas e interdisciplinares para o desenvolvimento de moléculas com potencial profilático, terapêutico e diagnostico. Neste contexto, a presente tese traz a aplicação de técnicas experimentais para produzir e caracterizar proteínas artificiais engenheiradas computacionalmente contra os vírus Zika e SARS-COV-2. O capítulo 1 é dedicado aos nanocorpos (Nb) anti-RBD da spike de SARS-CoV-2 (AB.2, 72.1 e HUM-7). A produção dos Nbs foi bem-sucedida, com exceção do HUM-7. Ensaios de termoforese em microescala (MST) mostraram que o Nb-AB.2 tem uma alta afinidade pelo RBD (𝐾𝐷 de 7,11 nM), mas contra a proteína spike, essa afinidade decai (𝐸𝐶50 de 3,5 𝜇g/mL). Em contraste, o Nb-72.1 mostrou baixa afinidade pelo RBD (𝐾𝐷 de 381 nM), mas se liga à proteína S com um 𝐸𝐶50 de 45 nM. Nossos dados sugerem que a seletividade por certos estados conformacionais da spike ditam a afinidade de ligação e, dessa maneira, é importante considerar a spike completa no processo de engenharia de proteínas. No capítulo 2, foram construídos os formatos homobivalentes dos Nbs AB.2 e 72.1, (𝑁 𝑏−𝐴𝐵.2)2 e (𝑁 𝑏−72.1)2, o formato heterobivalente (𝑁 𝑏−𝐴𝐵.2 + 72.1), inspirados pelo mecanismo de avidez. Ensaios de neutralização com pseduovírus de SARS-CoV-2 mostraram baixo potencial de neutralização para o (𝑁 𝑏 − 72.1)2 com um 𝐼𝐶50 de 313,4 𝜇g/mL). No capítulo 3 uma proteína artificial engenheirada contra a alça de fusão do vírus Zika (ZVPA3) foi produzida e caracterizada. A ZVPA3 foi capaz de neutralizar in vitro o ZIKV (𝐸𝐶50 de 3,65 𝜇M), demonstrando também reatividade cruzada ao neutralizar as infecções por DENV-1 e DENV-2 𝐸𝐶50 de 0,87𝜇M e 0,98𝜇M, respectivamente. Os resultados obtidos demonstram que a ZVPA3 é uma candidata em potencial para o desenvolvimento de estratégias terapêutica ou profiláticas flavivírus e destaca o potencial da engenharia computacional como uma ferramenta poderosa na busca por novos agentes terapêuticos e profiláticos.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - ANTÔNIO JOSÉ DA COSTA FILHO
Externo à Instituição - FEDERICO MATIAS ISSOGLIO
Presidente - 1208272 - ROBERTO DIAS LINS NETO
Interno - 1354207 - SEVERINO ALVES JUNIOR