Banca de DEFESA: LARISSA SILVA DE MACEDO

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: LARISSA SILVA DE MACEDO
DATA : 20/03/2024
HORA: 14:00
LOCAL: Departamento de Genética
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DE ESTRATÉGIAS VACINAIS PROFILÁTICAS BASEADAS EM PLATAFORMA DE ÁCIDO NUCLEICO E YEAST SURFACE DISPLAY UTILIZANDO A INFECÇÃO PELO SARS-CoV-2 COMO MODELO

PALAVRAS-CHAVES:

Adjuvante. Coronavírus. Multi-epítopo. Vacina de DNA. Pichia pastoris.

PÁGINAS: 152
RESUMO:

O SARS-CoV-2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus - 2) é considerado um vírus emergente de importância mundial, sendo causador da doença do coronavírus 2019 (COVID-19). Assim, diferentes estratégias vacinais foram desenvolvidas e licenciadas para uso em humanos. Contudo, o surgimento de novas variantes e a possibilidade de novos surtos têm causado questionamentos acerca da eficácia das vacinas formuladas com a sequência de referência isoladas no início do surto. Por outro lado, estudos que abrangem plataformas vacinais de fácil edição e baixo custo combinando eficácia e segurança mostram-se alternativas promissoras, como as vacinas baseadas em antígenos sintéticos. Neste contexto, se propõe o uso de antígeno sintético desenvolvido como base para a construção de vacina de DNA com intuito de avaliar a capacidade imune do antígeno, e também a construção de vacina baseada em levedura recombinante como forma alternativa de apresentação do multi-epítopo. A partir da síntese do antígeno sintético (Scov2-Sint1), composto por epítopos das proteínas Spike e Nucleocapsídeo do SARS-CoV-2), foram realizadas etapas de digestão enzimática e subclonagem nos vetores de expressão pVAX (para as vacinas de DNA; estratégia 1) e pPGK_Agα (para as estratégias de ancoragem de proteínas na levedura; estratégia 2). A inserção correta do antígeno aos respectivos vetores foi confirmada por meio de PCR e análise de restrição. O gene RBD também foi clonado no vetor pVAX1 para ser usado com antígeno controle nos ensaios de imunização para a estratégia de DNA. Para estratégia 1, os plasmídeos contendo a sequência de interesse e o vetor vazio (controle negativo) foram preparados e ajustados para uma concentração final de 50 μg em 30 μl. Os grupos experimentais testados foram: I) pVAX; II) Scov2-Sint1; III) RBD; IV) RBD/ Scov2-Sint1. Já para a estratégia 2, as células de Pichia pastoris (GS115) foram transformadas com as construções para o vetor pPGK_Agα de modo integrativo. Os transformantes foram analisados quanto à expressão da proteína por meio de Western-blot, e a ancoragem verificada por meio de Yeast-ELISA. As leveduras foram preparadas e ajustadas para uma concentração final de 10 YU (unidades de leveduras) em 50 µL, inativadas por meio de aquecimento a 60 ºC durante 1 hora. Os grupos experimentais foram: G1) P. pastoris GS115; G2) P. pastoris - Scov2-Sint1; e G3) P. pastoris – Spike. Ambas estratégias foram executadas com aplicação de duas doses com intervalo de 7 dias, por via intramuscular em camundongos BALB/c fêmeas (6-8 semanas). Após 14 dias da segunda dose, os animais foram anestesiados e eutanasiados, seguido da condução das análises imunológicas utilizando amostras de sangue e baço dos animais, sendo parte da amostra sanguínea direcionada para a análise hematológica. Fragmentos do músculo das patas inoculadas na vacinação foram coletados para análise histopatológica. De maneira geral, as análises hematológicas e histopatológicas demonstraram ausência de danos. A vacinação com Scov2-Sint1 demonstrou um perfil de resposta predominantemente celular comparada a outros grupos, o que corrobora com os epítopos escolhidos. Além disso, os antígenos vacinais, sobretudo o gene sintético, levou a ativação de células TCD4+ e TCD8+, representando estratégia promissora contra o SARS-CoV-2.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1453736 - ANTONIO CARLOS DE FREITAS
Externa à Instituição - FERNANDA CRISTINA BEZERRA LEITE - UFRPE
Externa à Instituição - ISABELLE FREIRE TABOSA VIANA - Fiocruz - PE
Interna - 1061810 - VALESCA PANDOLFI
Externa à Instituição - VIRGINIA MARIA BARROS DE LORENA - Fiocruz - PE