Banca de QUALIFICAÇÃO: MATHEUS CAVALCANTI DE BARROS

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: MATHEUS CAVALCANTI DE BARROS
DATA : 05/12/2023
LOCAL: Anfiteatro do PPGCB
TÍTULO:

LECTINA COAGULANTE DE Moringa oleifera (cMoL): CARACTERIZAÇÃO FÍSICO-QUÍMICA, INVESTIGAÇÃO TOXICOLÓGICA, ATIVIDADE ANTIFÚNGICA E PEPTÍDEOS BIOATIVOS DERIVADOS

PALAVRAS-CHAVES:

Proteína antifúngica. Toxicologia. Quenching molecular. Fluorescência.

PÁGINAS: 100
RESUMO:

Sementes de Moringa oleifera são amplamente empregadas para o tratamento da água por serem fontes de lectinas e outras moléculas coagulantes. Lectinas são proteínas com alto potencial biotecnológico devido à capacidade de ligar seletiva e reversivelmente a carboidratos. cMoL, lectina coagulante das sementes de M. oleifera, reconhece preferencialmente a galactose e apresenta atividades anticâncer, inseticida, antiparasitária e anti-inflamatória. Até o momento estudos relacionados a atividade antifúngica ou efeitos toxicológicos in vivo de cMoL são escassos e a sua interação com carboidratos ainda não é bem esclarecida. Este estudo objetivou avaliar o potencial antifúngico de cMoL contra espécies de Cryptococcus, investigar a toxicidade in vivo da lectina em camundongos e elucidar os mecanismos envolvidos na ligação proteína - carboidrato. cMoL foi purificada em coluna cromatográfica de gel guar. A atividade antifúngica foi realizada com três espécies de Cryptococcus (C. neoformans B3501 e H99 e C. gattii R265) a partir do ensaio de microdiluição em caldo. O efeito de cMoL na viabilidade das células fúngicas foi analisado em citometria de fluxo com os corantes anexina V e iodeto de propídeo. A toxicidade aguda foi determinada pela administração de dose única de cMoL (200 mg/kg) por via oral ou intraperitoneal em camundongos Swiss fêmeas (Comitê de ética n° 140/2022). Após 14 dias, foram analisados o consumo de água e ração, variação de peso, parâmetros hematológicos e bioquímicos, histopatologia (fígado, rins, baço, coração e pulmão) e os níveis séricos de citocinas. A genotoxicidade foi avaliada através do ensaio cometa e do teste do micronúcleo em camundongos. Nos estudos de interação, a emissão de fluorescência de cMoL após titulação com glicose e galactose (0 - 11 mM) foi utilizada para calcular as constantes de Stern-Volmer (Ksv), constantes de ligação (Ka), energia livre de Gibbs (∆G) e coeficiente de Hill. A desnaturação induzida por ureiamonitorada por espectroscopia de fluorescência, dicroísmo circular e atividade hemaglutinante (AH) foi utilizada para confirmar a dimerização da proteína. A dinâmica molecular foi realizada com o pacote Amber 20 para simulações biomoleculares. cMoL inibiu o crescimento de todos os isolados testados com concentração mínima inibitória (CMI50) de 7,5 µg/mL. Os dados de citometria de fluxo mostraram que cMoL (7,5 µg/mL) diminuiu significativamente a viabilidade das células. Quanto à toxicidade, cMoL (200 mg/kg) não promoveu morte dos animais, efeitos toxicológicos ou genotoxicidade. Os experimentos de interação revelaram que cMoL interage com os carboidratos por mecanismo estático (diminuição do Ksv) e interações espontâneas (ΔG < 0). A lectina apresentou Ka da ordem de 10² com maior seletividade para glicose. Os complexos proteína-ligante foram estabilizados por ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas (ΔH > 0, ΔS < 0). O parâmetro de Hill (h ~ 2) indicou que a ligação ocorre através do dímero de cMoL e isso foi confirmado a partir da desnaturação induzida por ureia monitorada com fluorescência, dicroísmo circular e HA. A dinâmica molecular demonstrou que a glicose liga-se na grande cavidade formada entre os monômeros de cMoL. A ausência de toxicidade juntamente ao potencial antifúngico contra Cryptococcus estimulam esforços para explorar o potencial biotecnológico de cMoL como agente antifúngico. A elucidação dos mecanismos bioquímicos e biofísicos envolvidos na interação cMoL – galactose/glicose permite a melhor compreensão das atividades biológicas dessa lectina, incluindo seu potencial antifúngico.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1960817 - THIAGO HENRIQUE NAPOLEAO
Interno - ***.833.854-** - EMMANUEL VIANA PONTUAL - UFPE
Externo ao Programa - 1963108 - JORGE LUIZ NEVES - UFPE