Banca de DEFESA: TULÍBIA LAURINDO SILVA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: TULÍBIA LAURINDO SILVA
DATA : 02/08/2023
HORA: 13:30
LOCAL: Anfiteatro do PPGCB
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DO PERFIL PROTEICO/PEPTÍDICO E DE ATIVIDADES BIOLÓGICAS DA SECREÇÃO CUTÂNEA DE Leptodactylus vastus LUTZ 1930 (AMPHIBIA: LEPTODACTYLIDAE)

PALAVRAS-CHAVES:

anuros; glândulas cutâneas; ocelatina; peptídeo antimicrobiano; hemostasia.

PÁGINAS: 95
RESUMO:

A primeira barreira entre os anfíbios e o ambiente é o tegumento, envolvido com funções como proteção mecânica, defesa contra patógenos, controle da passagem de água, respiração, percepção sensorial, coloração e camuflagem. Este tegumento é composto por epiderme e derme, onde há presença de glândulas que secretam diferentes compostos bioativos. Leptodactylus vastus é uma rã endêmica do Brasil que ocupa diferentes biomas e pode ser encontrada em toda a região Nordeste brasileira. A presente tese teve como objetivo investigar o perfil proteico e peptídico da secreção de glândulas cutâneas de L. vastus (SLV) e avaliá-la quanto às atividades hemolítica e antimicrobiana, bem como efeitos sobre a coagulação sanguínea. SLV foi coletada por meio de eletroestimulação manual. Para avaliar o perfil proteico, foram realizadas as seguintes etapas: dosagem de proteínas; eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes (SDS-PAGE) seguida po espectrometria de massas (EM); avaliação da presença de proteases similares à tripsina; ensaio de hemaglutinação; teste de nibição de tripsina. SLV foi avaliada quanto à atividade hemolítica sobre eritrócitos humanos, atividade antimicrobiana contra bactérias (Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis , Escherichia coli e Salmonella enterica serovar. Enteritidis) e fungos (Candida albicans,  Candida parapsilosis, Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii) e influência em parâmetros da coagulação sanguínea (tempo de protrombina, TP, e tempo de tromboplastina parcialmente ativada, TTPA). Na caracterização do perfil peptídico, SLV foi submetida à cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e as frações foram testadas quanto à à capacidade de inibir o crescimento de Staphylococcus aureus e Escherichia coli. A fração mais ativa foi submetida a EM e sequenciamento de aminoácidos por degradação de Edman. SLV apresentou uma concentração de proteínas de 2,25 mg/mL. Em SDS-PAGE, foi possível observar a presença de sete bandas polipeptídicas. EM revelou similaridade das proteínas presentes nas bandas 3, 4 e 5 com a enzima metanotiol oxidase (uma proteína ligadora de selênio) das espécies de rãs aquáticas Xenopus tropicalis e Xenopus laevis. SLV contém diferentes proteases, porém não foi detectada a presença lectinas (atividade hemaglutinante) e inibidores de tripsina. SLV apresentou baixa atividade hemolítica (máximo de 8,6%) e não apresentou atividade antibacteriana nem antifúngica contra os isolados testados. Quanto aos efeitos na cascata de coagulação foi observado que a SLV prolongou significativamente o TP, chegando a 90 segundos nas maiores concentrações da amostra (50 e 100 µg/mL) e o TTPA, atingindo até 54 segundos no ensaio com 100 µg/mL da secreção. O perfil de SLV em RP-HPLC indicou 26 picos (frações) de peptídeos (absorbância a 216 nm), dos quais 7 foram capazes de inibir o crescimento de S. aureus e/ou E. coli em até 25% e apenas 1 (fração 25) inibiu o crescimento de E. coli em 25% e de S. aureus em 50%. Recromatografia da fração 25 resultou em 2 picos, sendo que o primeiro apresentou uma massa molecular de 2510.7 Da e sequência GLLDVLKGAA KNVVGGLASK VMEKL, indicando se tratar de uma ocelatina. Quando isolado, esse peptídeo foi capaz de inibir em quase 100% o crescimento das bactérias E. coli, K. pneumoniae e P. aeruginosa a partir das concentrações de 16, 32 e 128 µM, respectivamente. Em conclusão, a secreção cutânea de L. vastus contém uma proteína ligadora de selênio já detectada na pele de outros anuros, porém sem função totalmente esclarecida, bem como moléculas capazes de inibir o processo de coagulação sanguínea e peptídeo antimicrobiano da classes das ocelatinas. Os resultados estimulam a continuidade de estudos de bioprospecção dessa secreção e identificação de outras proteínas e peptídeos bioativos.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1960817 - THIAGO HENRIQUE NAPOLEAO
Interno - ***.833.854-** - EMMANUEL VIANA PONTUAL - UFPE
Interna - 3245838 - THAMARAH DE ALBUQUERQUE LIMA
Externa ao Programa - 3341407 - ANA PATRICIA SILVA DE OLIVEIRA SANTOS - UFPEExterna ao Programa - ***.691.724-** - POLLYANNA MICHELLE DA SILVA - UFPE