Desenvolvimento de eletrodo biossensível baseado em polipirrol e nanoestruturas de grafeno para o diagnóstico diferencial de HPV
Biossensor; Diagnóstico; Papilomavírus humano; Pirrol; Pontos quânticos de grafeno; Voltametria cíclica
A infecção pelo papilomavírus humano (HPV) é uma das Infecções Sexualmente Transmissíveis (IST's) mais frequentes no mundo. O HPV é um vírus de DNA não envelopado que possui mais de 200 genótipos catalogados divididos em genótipos de alto e baixo risco oncogênico. A frequente infecção pelo HPV pode desencadear o câncer de colo uterino e a utilização de novos mecanismos de diagnóstico podem ser atrativos para o melhor rastreio desse processo oncogênico. Nesse sentido, objetivou-se construir eletrodos biossensíveis baseados em polipirrol (PPy) e pontos quânticos de grafeno (GQDs) para o diagnóstico diferencial de HPV. Inicialmente foi utilizado um eletrodo convencional de ouro, no qual foi realizada a eletropolimerização do polímero condutor pirrol e, posteriormente, para a obtenção dos grupos carboxílicos necessários, à adsorção dos pontos quânticos de grafeno. Em seguida, a sonda de oligonucleotídeos aminada MY09 foi imobilizada por meio da ligação covalente aos GQDs. O bloqueio dos sítios ativos livres e inespecíficos foi realizado pela albumina do soro bovino (BSA), logo em seguida, amostras contendo HPV de alto (HPV16, 18, 31, 33, 45 e 58) e baixo risco oncogênico (HPV6 e 11) foram testadas para observação dos eventos de reconhecimento e hibridização através de plasmídeos recombinantes contendo o gene L1 do capsídeo viral. Técnicas eletroanalíticas, como a voltametria cíclica e análises topográficas, através microscopia de força atômica, foram realizadas na caracterização do sistema sensor. Através da nanoestruturação da plataforma sensora, foi possível observar a assertiva estabilidade do sistema em cada etapa de construção, sendo a mesma reprodutível e apresentando perfis de respostas eletroquímicas expressando diferentes padrões para os diferentes genótipos de HPV testados. Dessa forma, os protótipos foram capazes de identificar a presença do HPV em quantidades ínfimas, de 2μL, em diferentes concentrações, de 1pg/µL-1 a 75pg/µL-1, por meio de rápidas respostas analíticas que foram obtidas através de um tempo de 5 minutos de análise. Portanto, o sensor proposto foi capaz de identificar os diferentes tipos de HPV em amostras plasmidiais e de cDNA.