Desenvolvimento de um modelo celular de coinfeccao entre Mycobacterium tuberculosis e SARS-CoV-2 para avaliacao das vias de ativacao genica na resposta imune
Tuberculose; Mycobacterium tuberculosis; COVID-19; SARS-CoV-2; Resposta Imune.
Mycobacterium tuberculosis (Mtb), principal agente etiológico da Tuberculose (TB), permanece como a maior causa de mortalidade por um único agente infeccioso no mundo. O surgimento do SARS-CoV-2, responsável pela pandemia de COVID-19, trouxe novas preocupações quanto aos efeitos imunopatológicos de uma possível coinfecção envolvendo ambos os patógenos, especialmente por atuarem predominantemente no trato respiratório. Apesar da relevância clínica, os mecanismos imunológicos envolvidos nessa interação ainda são pouco compreendidos. Neste trabalho, realizamos um protocolo experimental para padronizar a coinfecção Mtb + SARS-CoV-2 em um modelo in vitro utilizando células epiteliais pulmonares humanas (A549). O protocolo compreende oito etapas fundamentais: (I) cultivo de Mtb, (II) manutenção das células A549, (III) preparação dos estoques virais de SARS-CoV-2, (IV) determinação dos títulos infecciosos, (V) coinfecção sequencial das células, (VI) quantificação da carga bacteriana intracelular, (VII) avaliação da viabilidade viral e (VIII) descontaminação dos sobrenadantes. Após infecção inicial com Mtb (cepa H37Rv) e subsequente infecção com SARS-CoV-2 (hCoV-19/Brazil/PE-FIOCRUZ-IAM4372/2021) após 24 horas, as células foram incubadas por mais 72 horas. Em seguida, foram realizadas análises de expressão gênica das citocinas IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-1β por RT-qPCR, além da quantificação das citocinas IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ e TNF-α nos sobrenadantes por citometria de fluxo. Os resultados demonstraram que a coinfecção levou à supressão dos níveis de IFN-γ, TNF-α e IL-10, concomitantemente à indução de IL-6 e IL-1β, quando comparadas a células não infectadas. Tais achados indicam um perfil pró-inflamatório exacerbado, sugerindo que a coinfecção pode potencializar a resposta inflamatória pulmonar, contribuindo para a gravidade clínica observada em pacientes. Este estudo contribui significativamente para a compreensão dos mecanismos imunopatológicos associados à coinfecção Mtb + SARS-CoV-2, fornecendo um modelo experimental robusto para outras investigações futuras.