DESENVOLVIMENTO DE MÉTODOS ANALÍTICOS PARA QUANTIFICAÇÃO
SIMULTÂNEA DOS BIOMARCADORES 3-METILADENINA E ADENINA SOBRE
ELETRODOS IMPRESSOS DE CARBONO E DA QUINURENINA POR
FLUORESCÊNCIA UTILIZANDO IMAGENS DIGITAIS POR SMARTPHONES
Eletrodos impressos de carbono; Biomarcadores; Imagens digitais de
fluorescência; 3-Metiladenina; Quinurenina.
Este trabalho teve como objetivo desenvolver métodos analíticos sensíveis, seletivos e rápidos
para a determinação simultânea dos biomarcadores de doenças humanas 3-metiladenina (3-
mAde) e adenina (Ade) sobre eletrodos impressos de carbono (SPCEs) descartáveis e da
quinurenina (Kyn) utilizando fluorescência e imagens digitais (FDIB) por smartphones, para
aplicações em diagnósticos de doenças. O comportamento anódico individual e simultâneo da
3-mAde e da Ade foram investigados em eletrólitos suporte aquosos sobre SPCEs descartáveis,
utilizando a voltametria cíclica (CV), voltametria de pulso diferencial (DPV) e voltametria de
onda quadrada (SWV), visando o desenvolvimento de um método eletroanalítico simples
rápido e sensível para a determinação simultânea da 3-mAde e da Ade em amostras biológicas,
a partir da separação e hidrólise do DNA. Diferentes condições experimentais foram exploradas
para favorecer os sinais analíticos anódicos dos analitos, como o condicionamento
eletroquímico do SPCE; janelas de potencial aplicada, velocidade de varredura aplicada,
varreduras sucessivas e pôr fim a influência do eletrólito suporte aquoso e do pH. Um novo
método eletroanalítico utilizando a DPV, para a quantificação simultânea da Ade e da 3-mAde
foi então desenvolvido, com uma faixa linear de 0,50 a 10,00 μmol L⁻¹ e limite de detecção
(LOD) de 0,34 μmol L⁻¹ para a Ade e de 2,00 a 10,00 μmol L⁻¹, LOD de 0,64 μmol L⁻¹ e
recuperação entre 95,2 e 101% para 3-mAde em amostras sintéticas. A fluorescência da Kyn
foi investigada individualmente e a partir do produto da reação de derivatização com cloreto de
dansila (DNS-Cl) realizada para formação do adulto Kyn-DNS, que apresentou fluorescência
de alta intensidade. Diferentes condições experimentais foram investigadas para favorecer esta
reação de derivatização como composição química do meio, pH, concentração de reagentes e
tempo. Uma câmara escura de fluorescência foi desenvolvida e confeccionada a partir de uma
impressora 3D, com UV-LEDs, suporte de soluções e amostras e um smartphone, para fornecer
a radiação de excitação e capturar as imagens digitais de emissão de florescência (FDIB), para
determinação da Kyn em amostras de saliva, Kyn-DNS/3Dcâmara/FDIB. O método Kyn
DNS/3Dcâmara/FDIB proposto demonstrou uma faixa linear de 0,50 a 7,00 µmol L⁻¹, LOD de
0,05 µmol L⁻¹, precisão ≤ 2,68% e recuperação entre 92,1% e 106% para amostras de saliva
sintética, apresentando bons parâmetros de química verde. O método Kyn
DNS/3Dcâmara/FDIB foi avaliado aplicando os testes t e F utilizando um método
espectrofluorométrico de referência. Ambos os métodos propostos em relação a métodos
convencionais de análise, demonstraram ser simples, seletivos, rápidos e de baixo custo
apresentando alto potencial de aplicação para o uso no diagnóstico e tratamento precoce de
doenças epigenéticas e neurodegenerativas.