A resistência bacteriana aos antibióticos tem sido um dos maiores obstáculos para o sucesso
na terapia antimicrobiana convencional. As bactérias desenvolveram, ao longo do tempo,
mecanismos capazes de reduzir ou inibir a atividade terapêutica dos antimicrobianos através
dos sistemas de efluxo ativos. As bombas de efluxo estão presentes em variadas espécies de
bactérias, tanto Gram-positivas quanto Gram-negativas e são capazes de extrusar antibióticos
de várias classes. Vários estudos já demonstraram que alguns compostos de origem natural
como os sesquiterpenos têm atividade inibidora de bombas de efluxo em cepas resistentes de
Staphylococcus aureus. Este trabalho tem como objetivo analisar a ação antibacteriana e
inibidora de bombas de efluxo por lipossomas encapsulando os sesquiterpenos nerolidol,
farnesol, α-bisabolol, trans-cariofileno e óxido de cariofileno, avaliados através de testes in
vitro contra bactérias de S. aureus portadoras de bombas de efluxo. A atividade antibacteriana
direta foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de cada
sesquiterpeno e das suas respectivas formulações lipossomais. Foram utilizadas as cepas de S.
aureus 1199B, IS-58, RN4220 e K2068, portadoras das bombas de efluxo NorA, Tet(K),
MsrA e MepA respectivamente. Os testes ocorreram através de microdiluição em caldo e a
leitura realizada pela adição de resazurina. A avaliação da inibição de bombas de efluxo foi
avaliada pelo método de microdiluição seriada em caldo, associando-se as substancias testes
aos antibióticos e ao brometo de etídio. A redução das CIMs do antibiótico e do brometo
indicou inibição da resistência bacteriana. Para cada cepa utilizou-se um antibiótico especifico
substrato da bomba de efluxo de cada bactéria. Para 1199B utilizou-se o antibiótico
norfloxacina; para IS-58 utilizou-se tetraciclina; em RN4220 aplicou-se eritromicina. A
inibição de bombas de efluxo também foi avaliada pela medição de emissão de fluorescência
do brometo de etídio, onde um aumento da intensidade fluorescência indicou inibição do e
aprisionamento do brometo de etídio. Quando isolado, o nerolidol exibiu atividade
antibacteriana direta contra as cepas IS-58 e RN4220, apresentando uma CIM de 32 µg/mL e
128 µg/mL respectivamente. O farnesol, α-bisabolol e óxido de cariofileno isolados
apresentaram atividade antibacteriana direta contra S. aureus 1199B, IS-58 e RN4220 com
CIMs variando entre 16 µg/mL a 512 µg/mL. Contudo as nanoformulações lipossomais não
apresentaram atividade antibacteriana direta com uma CIM de > 1024µg/mL. Em termos de
inibição da bomba de efluxo, o lipossoma/farnesol, lipossoma/α-bisabolol e lipossoma/óxido
de cariofileno atuaram como potenciais inibidores da NorA presente em S. aureus 1199B,
reduzindo a CIM do brometo de etídio. Lipossoma/nerolidol e lipossoma/farnesol atuaram
como potenciais inibidores de MsrA na cepa de S. aureus RN4220, reduzindo a CIM do
brometo de etídio. Os sesquiterpenos isolados apresentaram ação significativa: o nerolidol,
farnesol, trans-cariofileno e óxido de cariofileno atuaram como possíveis inibidores de NorA
e MepA; O α-bisabolol, trans-cariofileno e óxido de cariofileno atuaram como possíveis
inibidores de Tet(K), e o farnesol, trans-cariofileno e óxido de cariofileno isolados atuaram
como inibidor de MsrA e MepA. Dentre todas as substâncias testadas, o nerolidol, trans-
cariofileno e óxido de cariofileno isolados destacaram-se pela potente inibição da NorA,
apresentando ação ainda mais eficaz ou equivalente ao CCCP. Mais estudos são necessários
para descrever os alvos moleculares envolvidos nestes mecanismos.

Introdução: Na Relação Nacional de Plantas Medicinais de interesse ao Sistema Único de Saúde o Stryphnodendron adstringens é descrito pelo seu potencial cicatrizante, anti-inflamatório, antisséptico, antimicótico e antifúngico. Esta planta tem sido estudada com seus taninos como princípio ativo no tratamento de infecções por Papilomavírus Humano e profilaxia do câncer cervical (Carta Patente PI 1004542-2). Contudo, não há relato científico sobre ação dos taninos e taninos incorporados a nanopartículas de prata no tratamento de lesões intraepiteliais escamosas de alto grau (HSIL) no colo uterino. Objetivo geral: Avaliar a viabilidade do uso tópico de produto tecnológico de Stryphnodendron Adstringens (Mart.) Coville com e sem incorporação
às nanopartículas de prata em lesões intraepiteliais escamosas de alto grau no colo uterino. Materiais e Métodos: Ensaio clínico randomizado, realizado no período de novembro de 2018 a março de 2024. O extrato etanólico do pó da casca do barbatimão foi obtido por meio alcoólico etanólico. Preparou- se o composto farmacêutico contendo 20% de barbatimão, 8% propilenoglicol e 72%de polawax (para o grupo A); e 20% de barbatimão, 8% propilenoglicol, 71,9% de polawax e 0,1% de nanopartículas de prata (para o grupo B). O estudo tem aprovação do Comitê Nacional de Ética em Pesquisa sob parecer 2.114.908. As participantes, mediante Termos de Consentimento Livre e Esclarecidos, foram mulheres usuárias do Sistema Único de Saúde no município de Arapiraca, diagnosticadas por biópsia com HSIL, randomizadas em 3 grupos: grupo A formulação com extrato de barbatimãoveiculado em creme polawax); grupo B (nanoformulação contendo extrato de barbatimão e nanopartículas de prata, veiculada em creme polawax); grupo C (grupo-controle). As mulheres foram acompanhadas e avaliadas quanto à situação clínica e ginecológica durante o uso do composto em estudo, bem como avaliadas em relação ao diagnóstico histopatológico antes e após o tratamento em estudo (grupos A e B), com grupo controle apenas em tratamento convencional. As análises estatísticas foram
realizadas através do Excel e Jamovi, usando os testes T, ANOVA, Fisher e McNemar. Resultados e discussão: De modo geral as participantes do estudo não apresentaram alteração clínica prejudicial após o uso do composto com extrato etanólico de Stryphnodendron adstringens, incorporado ou não às nanopartículas de prata. Nota-se regressão da lesão em 55,5% das mulheres do grupos A (n=9), em 33,3% das mulheres do grupo B (n=6) e em 12,5% das mulheres do grupo C (n=8), no entanto não houve diferença estatística significativa (F= 1.09; p= 0,35; η2 = 0.10)entre os diagnósticos histopalogógicos dos três grupos estudados. Foramdesenvolvidos e depositados no Instituto Nacional de Propriedade Industrial umaplicativo de software, uma patente de invenção e um desenho industrial comorecursos tecnológicos possíveis para contribuir no diagnóstico e seguimento das lesões cervicais, bem como para acompanhamento das mulheres em uso do composto em estudo. Conclusão: Os resultados obtidos não permitem determinar a capacidade de reparo do creme de extrato etanólico de Stryphnodendron adstringens, incorporado ou não asnanopartículas de prata, contudo há possibilidade de eficácia do produto com aumento da amostra em estudo.

A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é uma cultura de grande importância mundial. A podridão radicular é uma doença que causa grandes prejuízos e limita a produção de mandioca em todo o Brasil. Diversos patógenos são associados a esta doença, o que dificulta ainda mais o seu controle. O controle químico é inviável para o manejo da podridão radicular devido ao alto custo e baixa eficiência desses produtos em doenças do solo, sendo necessário o estudo de controles alternativos. O presente estudo teve como objetivos isolar e identificar patógenos da podridão radicular da mandioca, confirmar a patogenicidade dos isolados, produzir um bioinoculante a base de biochar e Trichoderma e testar in vivo seus efeitos sobre a severidade de patógenos e a qualidade do solo. Raízes de plantas de mandioca com sintomas de podridão radicular foram coletadas em uma área de plantio de mandioca no município de Garanhuns, Estado de Pernambuco, Brasil. Na mesma área foram coletas amostras de solo de plantas de mandioca assintomáticas. Os patógenos foram identificados com base em análise molecular e a patogenicidade testada em tubérculos e em plantas de mandioca. Cepas de Trichoderma foram testadas quanto a produção da enzima quitinase e antagonismo contra os patógenos da mandioca. O biochar foi produzido a partir de resíduos de fermentação de uva. O bioinoculante foi produzido com a inoculação do biochar com o fungo T. koningiopisis, e posteriormente avaliado no controle de patógenos da podridão radicular em experimento em casa de vegetação. Com base em análise molecular os isolados obtidos de raízes de mandioca foram identificados como: Curvularia sp., Diaporthe ueckeri, Fusarium agrestense, F. gossypinum, F. grosmichelii, F. triseptatum, Macrophomina phaseolina e Neocosmospora falcifomis. Todas as espécies identificadas causaram murcha e amarelecimento nas folhas, e lesões necróticas em tubérculos e manivas de mandioca. Os isolados do solo foram identificados como Trichoderma sp., T. koningiopsis e T. longibrachiatum. As maiores atividades da enzima quitinase foram produzidas por T. koningiopsis URM 8972 e T. longibrachiatum URM 6068, que apresentaram semelhante antagonismo e controle do crescimento micelial dos patógenos. No experimento em casa de vegetação o bioinoculante de biochar e T. koningiopsis URM 8972 reduziu significativamente a severidade da podridão radicular da mandioca causada por Curvularia sp. e F. agrestense, além disso, promoveu resistência e maior crescimento das plantas. Melhora da qualidade do solo foi observada com o bioinoculante, que aumentou os teores de P e K no solo. A combinação de biochar da uva e T. koningiopsis URM 8972 é uma ferramenta promissora para controlar a podridão radicular da mandioca, aumentar o rendimento da cultura de forma sustentável e melhora da fertilidade do solo.

A esporotricose é uma micose ocasionada por implantação traumática, subaguda ou crônica, causada por fungos termodimórficos do complexo Sporothrix spp., possuindo distribuição mundial, especialmente em áreas tropicais e subtropicais. A rota clássica da infecção fúngica ocorre através da inoculação do fungo presente no solo e em plantas. No Brasil, este padrão epidemiológico clássico prevaleceu até o início da década de 1990, entretanto, nos últimos anos, surtos da doença foram registrados sendo relacionados ao contato com felinos contaminados através de arranhadura ou mordedura. Desde então, os casos registrados de esporotricose aumentaram em todo o país e dados comprovam que o estado de Pernambuco, em especial, a região metropolitana, vem sendo afetada por esta micose, a qual se tornou uma doença de notificação compulsória em PE (Portaria nº 279/2015). Diante disso, é de grande importância o diagnóstico no estágio inicial da doença para um rápido e correto tratamento dos pacientes. O teste padrão ouro para diagnosticar a esporotricose é a cultura fúngica, porém, este método tradicional limita-se em relação ao tempo de espera e restringi-se a observação de características fenotípicas, não permitindo a correta diferenciação dos fungos que causam a doença. Neste sentido, com objetivo de sobrepor as deficiências comentadas acima, o presente trabalho visa a utilização da espectrometria de massas MALDI/TOF MS, uma técnica molecular promissora de identificação das espécies que compõem complexo Sporothrix spp. Com caráter inovador, a metodologia aplicada envolveu um protocolo de desnaturação e digestão enzimática a partir de fragmentos de tecido dos pacientes com análise proteômica direta. Os resultados obtidos referem-se a biomarcadores proteicos do hospedeiro e do fungo e com as análises realizadas chegou-se ao resultado promissor que as amostras estavam contaminadas, muito provavelmente, com Sporothrix schenckii de acordo com a correlação de Pearson. Sugere-se quem tal abordagem poderá na prática clínica ser utilizada em conjunto com os métodos tradicionais existentes proporcionando maior robustez no diagnóstico da esporotricose. Em paralelo, realizou-se um estudo epidemiológico da esporotricose em Pernambuco com adição de dados de georreferenciamento. O cenário obtido demonstrou distribuição da esporotricose em diferentes municípios do estado, com alta concentração de casos na região metropolitana. Ao todo, 91,1% dos pacientes relataram contato prévio com gatos e destes 70,7% são do sexo feminino. Em relação ao nível de escolaridade,46% relataram a conclusão do ensino médio e apenas 2% não eram alfabetizados. A principal manifestação clínica foi a linfocutânea, ocorrendo em 67% dos pacientes e a principal linha de escolha para o tratamento foi o itraconazol em 95,4%.

A infecção pelo vírus da Hepatite B (HBV) é considerada uma enfermidade de alta  morbimortalidade, apresentando diagnóstico complexo e quadro de persistência, fatores que  dificultam a detecção, terapêutica e cura. Relatos variados têm apontado os imunossensores  como importantes ferramentas de auxílio no diagnóstico de doenças, definido como um  dispositivo que converte respostas de eventos biológicos a partir da interação antígeno anticorpo em sinal elétrico. No presente estudo foram desenvolvidos biossensores para  detecção de anticorpos contra o nucleocapsídeo do HBV (Anti-HBc) mais perene apresentado  no diagnóstico da doença. Recentemente, o emprego de nanomateriais no desenvolvimento de  tais dispositivos tem despertado interesse devido às propriedades destes materiais.  Particularmente, os nanotubos de carbono (NTCs) têm oferecido aos imunossensores melhoria  na condutividade, aumento na velocidade de transferência de carga, aumento da área  eletródica com maior possibilidade de imobilização de biomoléculas. Nesta tese, foram  empregados o ácido hialurônico e o náfion como suporte para forte interação com os NTC  funcionalizados em eletrodos de carbono vítreo e de ouro fabricado sobre folha de acetato. Os  dispositivos foram caracterizados por técnicas de imagem (microscopia de força atômica) e  eletroquímicas (voltametrias de onda quadrada e cíclica), as quais demonstraram a  estabilidade da plataforma, imobilização eficaz e sensibilidade. O primeiro protótipo em  eletrodos de carbono vítreo modificado com filme de ácido hialurônico associado a nanotubos  funcionalizados apresentou resposta linear de 1 a 6ng/ml com limite de detcção de 0,03ng/ml.  No segundo protótipo com eletrodos impressos de ouro modificado com filme etanólico de  náfion associado a nanotubos funcionalizados, o imunossensor apresentou resposta linear de  0,5 até 2ng/ml, com limite de detecção de 0,15 ng/ml de anti-HBc. Os protótipos  desenvolvidos apresentam-se como potenciais para diagóstico da HBV.

Os produtos naturais têm se mostrado uma fonte promissora de substâncias químicas, sendo responsáveis, direta ou indiretamente, por cerca de 40% de todos os compostos bioativos disponíveis na medicina moderna. Extratos e óleos essenciais de plantas são descritos na literatura com potencial de atividade inseticida, com ação frente ao mosquito Aedes aegypti. Porém, uma nova área de pesquisa que aborda organismos marinhos vem ganhando espaço para esse mesmo fim. Diante disso, a busca por produtos naturais que venham a controlar a disseminação das larvas do mosquito vem crescendo bastante, principalmente estudo com macroalgas marinhas, devido a sua grande diversidade e produção de metabólicos secundários. Portanto, o presente estudo teve como objetivo a obtenção do óleo da Laurencia dendroidea pelas técnicas de hidrodestilação, arraste a vapor e fluido supercrítio e a comparação da composição destes óleos. Foram realizadas atividades biológicas com o óleo essencial e seus derivados obtidos via hidrodestilação frente ao mosquito A. aegypti. O óleo essencial, o hidrolato, o extrato aquoso obtido da hidrodestilação da L. dendroidea mostraram atividades significativas contra as larvas, com CL50 de 19,05 ppm (17,81-20,25); 42,83% (41,12-44,64); 49,08% (47,56-51,00), respectivamente. Esta mesma alga mostrou efeito de impedimento de oviposição significativo (p<0,05) para o óleo essencial nas concentrações de 15 e 20 ppm, para o extrato aquoso a 50% v/v e para o hidrolato a 20% v/v. Estes resultados mostram que os derivados da hidrodestilação desta alga são promissores no que diz respeito ao desenvolvimento de inseticida e deterrente de oviposição para serem usados no controle da disseminação do A. aegypti, por meio da interrupção do seu ciclo de vida. Além disso, vale destacar que silfiperfolan-7-β-ol e (-)-7-epi-silfiperfolan-6 β-ol foram identificados como sendo os compostos majoritários presentes nos óleos isolados pelas três técnicas de extração supracitadas. Estes compostos já foram descritos anteriormente e apresentaram atividades antimicrobiana e antioxidante, mas é o primeiro estudo inseticida na literatura que relata atividade do óleo essencial contra o Aedes aegytpi. Estes resultados podem levar assim ao desenvolvimento de produtos ecológicos de pesticidas e repelentes de oviposição para o manejo dessa praga.

A artrite reumatóide (AR), é uma doença crônica inflamatória, em cuja etiologia estão envolvidos fatores genéticos, ambientais e infecções. Dentre as infecções se destacam as virais cujas proteínas modificam a função dos sinoviócitos como ocorre com o Parvovírus B19 (PVB19). Estudos tem mostrado a participação das citocinas IL-6 e L-10 na fisiopatogenia da AR. O diagnóstico da AR se baseia em critérios clínicos, radiológicos e laboratoriais.Dentre os auto- anticorpos, o fator reumatóide (FR) apresenta alta sensibilidade e baixa especificidade. Por lado, o anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (ACCP) é um importante marcador para o diagnóstico e tem valor preditivo de um pior prognóstico. Sua detecção pelo ELISA, têm mostrado excelente desempenho diagnóstico, embora seja oneroso e mais demorado. Visando diagnósticos mais rápidos e práticos, os biossensores são ideais para testes tipo “point-of-care” devido à sua portabilidade. Os objetivos desta tese foram: avaliar a correlação dos niveis séricos de IL-10, IL-6 e a frequência do anti-IgG PVB19 com atividade clínica da AR mediante os índices compostos de atividade de doença (ICADs).em diferentes tratamentos e desenvolver um imunossensor eletroquímico label free para ACCP.Foi desenvolvido um estudo transversal para estimar a frequencia de anti-IgG PVB19 e determinar os níveis séricos da IL6 e IL10 pelo método ELISA.O imunossensor constituído por eletrodos screen printed de ouro,foi baseado no uso da SAM formada pela deposição do àcido tioglicólico.Oa antígenos foram imobilizadosde modo orientado via grupos carboxílicos do TGA. Os resultados mostraram uma frequencia de 73% (60/83) de IgG anti-PVB19 e uma correlação significativa entre os níveis de IL-6 e as medidas de atividade de AR nos pacientes com maior atividade inflamatória pelo EULAR. O maior contigente de pacientes IgG anti-PVB19 positivos estava com moderada e alta atividade pelo EULAR.O imunossensor eletroquímico apresentou uma resposta linear na curva de calibração, bom coeficiente de correlação e limite de detecção menor do que o método ELISA.

A ocorrência crescente de resistência bacteriana vem estimulando buscas por novos agentes não apenas antibacterianos, mas eficazes, frente mecanismos de resistência expressos pela bactéria, como bombas de efluxo. Compostos como 1,8-naftiridinas e sulfonamidas atraem o interesse de pesquisadores apresentando diversas atividades biológicas comprovadas, tornando promissora a síntese de novos derivados naftiridínicos com ações bioativas. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antibacteriana e inibidora de bombas de efluxo por 1,8-naftiridinas sulfonamídicas sintetizadas, sobre cepas de Staphylococcus aureus. A síntese ocorreu pela termólise do aduto do ácido de Meldrum, e os derivados sulfonamídicos finais, obtidos pela sulfonilação da 2-amino-5-cloro-1,8-naftiridina com diferentes cloretos de benzenossulfonila. Experimentos de docagem molecular foram realizados para avaliar a interação com proteínas de efluxo, utilizando o servidor CASTp para obter a estrutura topográfica dos bolsos de ligação. Foram avaliadas as propriedades farmacocinéticas, previsões de bioatividade e propriedades ADME (absorção, distribuição, metabolismo e excreção). A atividade antibacteriana foi avaliada pelo teste de microdiluição em caldo. A capacidade inibitória da bomba de efluxo foi avaliada pelos efeitos sinérgicos sobre o antibiótico e brometo de etídio (EtBr); e ensaios de fluorimetria. Foram sintetizados e testados os compostos: N-(5-oxo-5,8-diidro-1,8-naftiridin-2- il)-acetamida; 4-metil-N-(5-cloro-1,8-naftiridin-2-il)-benzenosulfonamida; 2,5-dicloro-N-(5-cloro-1,8-naftiridin-2-il)-benzenosulfonamida; 2,3,4-trifluoro-N-(5-cloro-1,8-naftiridin-2-il)-benzenosulfonamida e 3-trifluormetil-N-(5-cloro-1,8-naftiridin-2-il)-benzenosulfonamida, ou compostos 1, 2, 3, 4 e 5, respectivamente. Obteve-se um rendimento médio de 61,4%, para os compostos. A docagem molecular com NorA, revelou que derivados com melhor energia de ligação estavam na faixa de −8,2 a −9,1 kcal/mol. No acoplamento com MepA, as energias de ligação mais favoráveis estavam entre −7,1 a −8,8 kcal/mol. Os estudos de farmacocinética dos compostos revelaram um perfil favorável, podem sofrer absorção gastrointestinal, não cruzam a barreira hemato-encefálica, não são substratos da P-gp e o composto 4 foi o que menos inibiu as isoenzimas do citocromo P450. Não houve violação da regra dos cinco de Lipinski pelos compostos, indicando serem seguros e candidatos propícios a medicamento oral. Os compostos não apresentaram atividade antibacteriana intrínseca significativa, obtendo-se uma concentração inibitória mínima (CIM) ≥ 1024 μg/mL, frente as cepas SA-1199, SA-1199B, SA IS-58, SA RN4220 e SA K-2068. Porém, todos os compostos (1–5), induziram uma redução da CIM em duas vezes ou mais, ao se associarem aos antibióticos e EtBr, atuando como inibidores putativos de NorA, Tet(K), MsrA e MepA. Dente todos, o composto 4 destacou-se por induzir uma redução da concentração dos antibióticos norfloxacina, eritromicina, ciprofloxacina e tetraciclina em 16, 32, 8 e 6,3 vezes respectivamente. Na associação com o EtBr, o composto 4 reduziu a CIM em 4, 2,6, 16 e 8 vezes respectivamente, contra as cepas SA-1199B, SA IS-58, SA RN4220 e SA K-2068. Nos ensaios de fluorescência, o composto 4 foi capaz de aumentar a intensidade de emissão quando associado ao EtBr, nas cepas SA-1199B e SA-K2068, indicando uma ação inibidora das proteínas NorA e MepA. Em conclusão, as 1,8-naftiridinas sulfonamídicas sintetizadas apresentaram resultados inéditos para as atividades biológicas testadas, apresentando um perfil farmacocinético e energia de interação favorável, atuando como inibidores putativos das bombas de efluxo NorA, Tet(K), MsrA e MepA, em cepas de S. aureus.

A demanda por alimentos funcionais tem crescido nos últimos anos. Nesse contexto, novas formulações probióticas não lácteas tem atraído o interesse dos consumidores. Sendo assim, estratégias que ampliem a sobrevivência probiótica ao período de processamento, estocagem e após ingestão de novos produtos têm sido alvo de investigações. Com base nisso, o objetivo do presente trabalho foi produzir sucos probióticos e fermentados de manga, maracujá e goiaba, avaliando o estresse ácido durante a fermentação e a adição de inulina e xilitol nos sucos potencialmente simbióticos em estoque refrigerado. Para isso, investigou-se a capacidade do probiótico em fermentar sucos das três frutas, assim como o seu perfil metabólico quando submetido a estresse ácido. As duas melhores condições, considerando a sobrevivência microbiana, foram selecionadas para a elaboração dos sucos fermentados. A influência da adição de inulina (5 g/L) e xilitol (10%) aos sucos após fermentação, contendo L. rhamnosus, foi investigada durante 60 dias de estoque refrigerado (4 °C). Durante todo o período de estudo, a viabilidade (Log UFC/mL), o pH, a produção de ácido lático, o consumo de carboidratos e a sobrevivência (S (%)) celular ao teste de simulação das condições gastrointestinais (TSGI) foram acompanhados. As condições em que L. rhamnosus deteve melhor desempenho quando submetido ao TSGI foram nas fermentações do suco de manga sem estresse ácido (S (%) = 44,6) e após transferência sucessiva do micro-organismo do pH 6, para o pH 4 e consecutivamente para o pH 2 em meio à base de maracujá (S (%) = 47,3). Sendo assim, estes grupos foram selecionados para elaboração dos sucos com ou sem inulina e/ou xilitol e avaliação da estabilidade em estoque refrigerado. Dessa forma, observou-se que a adição de inulina favoreceu a sobrevivência probiótica. No que lhe concerne, a presença do xilitol não prejudicou o desempenho de L. rhamnosus, podendo assim ser utilizado como agente edulcorante em formulações contendo esse micro-organismo. O suco fermentado de manga acrescido de inulina e xilitol foi o que apresentou maior potencial para ser utilizado como veículo de L. rhamnosus ATCC 7469 devido à sobrevivência do probiótico ao TSGI no início (S (%) = 33,8) e após 15 dias (S (%) = 52,5) de estoque refrigerado.

A cana de açúcar é uma cultura de alto valor para a indústria, sendo cultivada em países tropicais e subtropicais. Semelhantemente a outras culturas agronomicamente importantes, o cultivo da cana enfrenta perdas significativas devido a condições edafoclimáticas inadequadas ou desfavoráveis. Neste cenário, a seca figura como um dos mais importantes estresses abióticos, sendo considerado de extrema importância quando se trata de perdas na produtividade da cana. O presente trabalho teve como objetivo analisar o perfil de transcrição de genótipos de cana-de-açúcar tolerantes e sensíveis ao déficit hídrico, utilizando a técnica de SuperSAGE. Para tanto, genótipos selecionados a partir do programa de melhoramento do Centro de Tecnologia Canavieira (CTC), com performances contrastantes sob déficit hídrico foram submetidos à supressão de rega por 24 horas e constituíram o material vegetal avaliado. Foram geradas quatro bibliotecas SuperSAGE, as quais incluíram 8.787.315 tags (26 pb) as quais, após a exclusão dos singlets, permitiram a identificação de 205.975 unitags. As bibliotecas mais representativas, considerando o número de tags, foram TC (tolerante controle; 2.516.454 tags) e SD (sensível estressada; 2.133.587 tags), enquanto TD (tolerante estressada; 750.226 tags) e SC (sensível controle; 762.492 marcas) foram menos abundantes. Para a anotação tag-gene, foram realizados alinhamentos contra ESTs de gramíneas de diferentes bancos de dados públicos, os quais foram posteriormente categorizados em termos de Ontologia Gênica (GO) usando a ferramenta Blast2GO. A partir das análises estatísticas considerando P ≤ 0,05 (teste Audic-Claverie) foi possível detectar as tags diferencialmente expressas, dentre as quais 213 foram identificadas como superexpressas. Desse total, 68 unitags possuíam anotação ou termo GO e 145 permaneceram sem anotação. Com o intuito de eleger um grupo com as melhores tags para validação via RT-qPCR foram selecionados candidatos que apresentaram respostas exclusivas, diferencialmente significativas e divergentes entre os bulks de genótipos tolerantes e sensíveis quando comparadas as condições de estresse e controle. Dez alvos que se apresentaram superexpressos na comparação entre contraste ‘tolerante controle’ versus ‘tolerante estressado’ e, ao mesmo tempo, reprimidos ou não significativos no contraste ‘sensível controle’ versus ‘sensível estressado’ foram selecionados para a etapa de validação via RT-qPCR. Dentre os candidatos testados, oito alvos (ACC deaminase, Aspartic proteinase, Thioredoxin, Na+ dependent neutral amino acid transporter, 6-phosphofructo-2-kinase, Beta-expansin 8 precursor, Acetil CoA carboxylase e Unknown) foram validados e confirmaram os dados SuperSAGE, apresentando-se superexpressos em quase todos os genótipos tolerantes e não significativos na maioria dos genótipos sensíveis, contribuindo assim para um melhor entendimento da percepção do estresse aplicado e podendo ser útil ao melhoramento genético da cana-de-açúcar. Adicionalmente, dez genes de referência foram selecionados para avaliação com algoritmos estatísticos (GeNorm, NormFinder and BestKeeper), dos quais seis (Histona, Ubiquitina, SAMDC, 25S rRNA, α-tubulina e GAPDH) foram considerados apropriados para normalizar os dados de expressão de raízes de genótipos de cana-de-açúcar sob seca, sendo Histona e α-tubulina relatados pela primeira vez para a espécie. Análises adicionais permitiram identificar representantes das quatro subfamílias (PIP, TIP, SIP e NIP) de aquaporinas descritas em vegetais superiores, apresentando 42 isoformas distintas. Ao menos 10 potenciais alvos distintos de isoformas de aquaporinas e suas respectivas unitags foram considerados promissores para estudos futuros, dos quais dois (SsPIP1-1 e SoPIP1-3/PIP1-4) foram validados via RT-qPCR e apresentaram potencial para desenvolvimento de marcadores moleculares para uso no melhoramento genético. 

A infecção pelo vírus da Zika (ZIKV) surgiu no Brasil em meados de 2015, trazendo agravantes como síndromes neurológicas e congênitas, que configuram grande problema de saúde pública visto que não há vacinas e sua disseminação é pouco controlável. A sintomatologia e estrutura do vírus se assemelham a dos demais flavivírus co-circulantes em regiões endêmicas, como o vírus da dengue (DENV), causando dificuldades no diagnóstico clínico diferencial. A presença de reações cruzadas são bem comuns nos testes disponíveis no mercado e a subnotificação decorrente da falta de um diagnóstico eficaz prejudica os estudos epidemiológicos relacionados com essa infecção. Tendo em vista que o diagnóstico diferencial é algo complexo, a procura por biomarcadores mais específicos e sensíveis se faz necessária. A proteína estrutural de envelope do ZIKV vem sendo aplicada em vacinas e em novos métodos de diagnósticos devido a sua alta atividade imunogênica e a sua composição peculiar, que diminuem a possibilidade de reações cruzadas com DENV e demais flavivírus. Ao se tratar de métodos de diagnóstico rápido, os nanoimunossensores eletroquímicos atendem bem aos requisitos demandados, uma vez que consistem numa tecnologia sensível, de fácil uso e passível de ser utilizada para diagnóstico “point-of-care”. Nesta tese foi desenvolvido um imunossensor eletroquímico com atividade redox intrínseca, formado por um nanocompósito confeccionado a partir da união de nanotubos de carbono (CNT), quitosana (CS) e azul da Prússia (PB), que foi depositado sobre um eletrodo impresso de carbono. O azul da prússia tem sido bastante usado para a construção de superfícies eletrocatalíticas, devido principalmente a sua boa estabilidade química e reversibilidade. Nos sensores eletroquímicos, os CNT aumentam a área superficial e transferência eletrônica A quitosana torna o nanocompósito mais biocompatível e estável em diferentes potenciais. Para as medidas analíticas no nanoimunossensor, foi utilizada a técnica de voltametria cíclica em ausência de sonda redox, utilizando uma janela de potencial entre - 0,4 e 0,6 V com uma taxa de varredura de 50 mV.s -1 . O nanoimunossensor foi capaz de detectar a proteína Envelope do ZIKV em uma faixa linear de 0,25 a 1,75 µg/mL (n = 8, p &lt; 0,01), com um limiar de reação (cutoff) de 0,20 µg/mL. O imunossensor desenvolvido trouxe novas perspectivas em medidas eletroquímicas sem o uso de sonda redox (redox probe-free), e potencial ferramenta para o diagnóstico do vírus Zika, podendo ser utilizado em pronto atendimento para acompanhamento clínico e também em estudos epidemiológicos.

O uso indiscriminado de inseticidas sintéticos no combate de pragas e vetores, vem causando impactos ambientais e populações de insetos resistentes. Estratégias alternativas que controle esses insetos são necessárias. O presente trabalho, descreve a atividade inseticida dos óleos essenciais de Piper corcovadensis (PcLEO) e 1-butil-3,4- Metilenodioxibenzeno (BMDB); Etlingera elatior (EeIEO) e dodecanal (NAL) e dodecanol (NOL) contra Sitophilus zeamais e investiga o uso de compostos voláteis (β – pineno, α – pineno, NAL e NOL) presentes em plantas frente ao Aedes aegypti nas fases de ovo e pupa. O óleo essencial foi extraído pela técnica de hidrodestilação em aparelho de tipo Clevenger modificado, por três horas, tratados com sulfato de sódio anidro e analisados por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG-EM). O BMDB foi sintetizado a partir do 4-bromo-1,2-metilenodióxibenzeno e os demais compostos foram adquiridos na Sigma-Aldrich. Avaliou-se a toxicidade por fumigação, contato e ingestão do PcLEO, EeIEO e seus compostos principais. Assim como, os parâmetros nutricionais, o índice de deterrência alimentar e atividade de enzimas digestivas em adultos de S. zeamais. O PcLEO e BMDB foram tóxicos por fumigação (CL50 de 9,46 e 0,85 μL/L de ar, respectivamente), por contato (DL50 de 9,38 μg/g de inseto e 6,16 μg/g, respectivamente) e por ingestão (CL50: 16,04 e 14,30 mg/g, respectivamente). Tanto o PcLEO quanto BMDB promoveram perda de biomassa pelos insetos e apresentaram efeito deterrente forte. Além disso, ambos foram capazes de inibir as atividades de tripsina e α-amilase. De acordo com os resultados obtidos, o BMDB provou ter um maior efeito sob adultos de S. zeamais. Em relação ao EeIEO, NAL e NOL, apresentaram toxicidade por fumigação, com CL50 de 0,031; 0,038 e 0,122 μL/L de ar, respectivamente. E foram tóxicos por contato, mostrando DL50 de 18,7; 22,8 e 4,4 μg/g respectivamente. Além disso, o óleo e os compostos interferiram nos parâmetros nutricionais dos insetos adultos de S. zeamais e a partir de 10,0 mg/g apresentaram forte deterrência alimentar, também foram capazes de inibir a atividade de α-amilase. Quando comparado os resultados, o NOL se destacou, o EeIEO e NAL, obtiveram resultados bem próximos, isso pode estar relacionado a composição química do óleo, já que o NAL representa mais de 50% da constituição do óleo. Nos ensaios com A. aegypti, os compostos voláteis foram capazes de inibir a eclosão de larvas e também apresentaram mortalidade para pupas. O NOL demostrou melhor resultado, no entanto, é necessário a continuidade destes ensaios para um melhor entendimento. Como conclusão, óleos essenciais e compostos voláteis, mostram-se como potenciais agente inseticida para controle de insetos vetores e pragas agrícolas.

O mosquito Aedes aegypti L. preocupa os órgãos de saúde mundial, por ser o
vetor responsável pela transmissão das arboviroses dengue, chikungunya, zika e febre
amarela. Por isso, o controle da dispersão deste inseto é fundamental para impedir ou
minimizar essas doenças. Diante disso, o presente estudo objetivou: (i) obter os extratos
e óleos essenciais das folhas de Piper corcovadensis através das técnicas de
hidrodestilação, maceração, fluido supercrítico, headspace, arraste a vapor e ultrassom;
(ii) identificar os compostos extraídos com a técnica de cromatografia gasosa acoplada
a espectrometria de massas (CG/EM) e quantificá-los através da cromatografia gasosa
(CG); (iii) comparar o perfil cromatográfico dos óleos essenciais e extratos obtidos
pelas técnicas estudadas; (iv) isolar e caracterizar o β-germacrene-D-4-ol; (v) avaliar as
atividades larvicida e deterrente de oviposição frente ao mosquito A. aegypti. Os
compostos majoritários obtidos através das técnicas de extração foram o terpinolene, 1-
butyl-3,4-methylenedioxybenzene, trans-caryophyllene e β-germacrene-D-4-ol. Os
métodos de arraste a vapor, maceração e o fluído supercrítico foram os melhores para
extrair o β-germacrene-D-4-ol, 26,48 ± 0,37%, 25,26 ± 0,39% e 24,38 ± 0,47%,
respectivamente. O isolamento do β-germacrene-D-4-ol (52,9 mg; rendimento de
26,5%) foi realizado através de cromatografia em coluna do extrato obtido por
maceração e tanto o extrato, quanto o β-germacrene-D-4-ol atuaram como larvicidas
(6,71 ± 0,16 ppm e 18,23 ± 1,19 ppm, respectivamente) e inibidores de oviposição nas
concentrações de 5, 10 e 50 ppm frente ao A. aegypti.

O processamento de uvas e derivados geram quantidade elevada de resíduos, e embora este fruto exiba teor de fenólicos elevado, uma parcela destes compostos fica nos subprodutos gerados pós-processamento. Dentre os
fitoquímicos presentes nos resíduos de uva podem destacar as antocianinas, associadas a benefícios à saúde, como propriedades antioxidante, antimicrobiana, anti-inflamatórias e anticâncer, além de prevenir contra diabetes, doenças cardiovasculares e neurodegenerativas. O objetivo deste trabalho foi investigar as atividades antioxidante, antimicrobiana e citotóxica do resíduo de uva Isabel (Vitis labrusca L.) e Magna (BRS Magna). O resíduo foi cedido por uma unidade processadora de suco de uva integral, do Vale do São Francisco, Petrolina-PE. Extratos antociânicos em fase aquosa e antocianinas purificadas foram utilizados na determinação das atividades investigadas. Análises cromatográficas identificaram 8 tipos de antocianinas, em teores entre 0,7 a 148 mg/L nos extratos, e de 0,48 a 108 mg/L nas antocianinas purificadas, e a malvidina-3-5-di-Ο-diglicosídeo foi a antocianina majoritária. Para a atividade antioxidante, foram encontrados para os extratos de resíduos úmidos e secos de uva Isabel teores de 63 e 85 μg EQ Trolox/ mL frente ao DPPH, e de 153 e 107 μg EQ Trolox/ mL frente ao ABTS, 120 e 220 μg EQ AA/ mL para a Capacidade Antioxidante Total - CAT, 36 e 139 μg EQ AG/ mL para o Poder Redutor –PR, respectivamente; e para os de resíduos de uva Magna úmidos e secos, teores de 41 e 92 μg EQ Trolox/ mL frente ao DPPH e de 174 e 125 μg EQ Trolox/ mL frente ao ABTS, 180 e 360 μg EQ AA/ mL para a CAT, 42 e 115 μg EQ AG/ mL para o PR, respectivamente. Para antocianinas purificadas a partir dos resíduos úmidos e secos de uva Isabel, os teores foram de 31.070 e 14.670 mg EQ Trolox/ mL frente ao DPPH e de 48.440 e 24.280 mg EQ Trolox/ mL frente ao ABTS, 50.730 e 69.060 mg EQ AA/ mL para a CAT, e 4.880 e 6.500 mg EQ AG/ mL para o PR, respectivamente; e para as de resíduos úmidos e secos de uva Magna, teores de 33.280 e 16.360 mg EQ Trolox/ mL frente ao DPPH e de 44.410 e 22.170 mg EQ Trolox/ mL frente ao ABTS, 61.860 e 72.330 mg EQ AA/ mL para a CAT, e 3.720 e 5.930 mg EQ AG/ mL para o PR, respectivamente. Quanto a atividade antimicrobiana, a Concentração Inibitória Mínima (CIM) para os extratos e as antocianinas purificadas de resíduos de uva Isabel e Magna (seco e úmido) foi de 3 e 4 mg/mL frente a S. aureus, E. coli, Salmonella sp. e L. monocytogenes. Na atividade citotóxica, nenhum dos extratos e antocianinas purificadas exibiram alta atividade citotóxica (CI % entre 75 e 100 %) frente as linhagens não- cancerígenas testadas (L929 e Vero) enquanto que para a linhagem cancerígena HeLa, todas antocianinas purificadas demonstraram atividade moderada ou alta (CI% acima de 50%), assim como o extrato de resíduo de uva Isabel seco, que apresentou CI% de 65,38%. Antocianinas purificadas de resíduo úmido de uva Isabel apresentaram CI50 de 74,4 e 136,2 μg/mL, para as linhagens HeLa e Vero, respectivamente. Esta pesquisa pretende contribuir para a promoção do potencial biotecnológico do resíduo de uva, contribuindo para o desenvolvimento de novos produtos funcionais nas indústrias de fitoterápicos, alimentos e cosméticos, implicando também no desenvolvimento econômico e na redução de danos ao no meio ambiente.