PPGBQF PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICA E FISIOLOGIA - CB DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA - CB Telefone/Ramal: Não informado

Banca de DEFESA: LUIS AFONSO SILVEIRA FARIAS

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LUIS AFONSO SILVEIRA FARIAS
DATA : 09/08/2022
HORA: 14:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

Isolamento e caracterização do inibidor de tripsina de folhas de Cissus sicyoides (insulina vegetal) e seus efeitos citotóxicos e imunomodulador


PALAVRAS-CHAVES:

Imunomodulação; cromatografia de afinidade, atividade hemolítica, necrose, análise fitoquímica


PÁGINAS: 100
RESUMO:

Cissus sicyoides L., família VITACEAE,é uma trepadeira tropical americana que possui diversas propriedades medicinais, sendo seu uso como antidiabético e anti-inflamatório os mais conhecidos. A família VITACEAE está entre as maiores fontes de inibidores de proteases vegetais, classe de proteína que vem ganhando destaque em pesquisas por suas aplicações biotecnológicas, como por exemplo na imunomodulação. Assim, este trabalho descreve a purificação e caracterização de um inibidor de tripsina obtido de folhas de C. sicyoides (CsFTI) e a avaliação de sua toxicidade e sua atividade imunomoduladora. O extrato proteico das folhas de C. sicyoides (EPFCs) foi obtido por homogeneização do pó das folhas secas em Tris-HCl (pH 10) 10%, p/v, por 16 horas a 25 °C. Para obtenção do inibidor, EPFCs foi aplicado em cromatografia de afinidade (Tripsina-Agarose). EPFCs e o CsFTI foram avaliados quanto a sua homogeneidade por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) em condições desnaturantes (SDS), e ainda, o CsFTI foi submetido a uma eletroforese bidimensional para verificar seu ponto isoelétrico e sua subunidade foi comparada com a de outras plantas. Outros parâmetros como quantificação proteica e atividade inibitória de tripsina foram realizados. Além disso, a análise fitoquímica do EPFCs foi realizada por cromatografia em camada delgada.  A estabilidade do inibidor foi avaliada em diferentes condições de temperatura (30-100 °C) e pH (3,0-9,0), tendo como parâmetro a atividade inibitória de tripsina. O EPFCs e CsFTI (1 mg/mL) foram avaliados quanto à atividade hemolítica com eritrócitos humanos e sua capacidade de promover necrose em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) tratados com as amostras (1,6–100 μg/mL). A atividade imunomoduladora de CsFTI e EPFCs sobre PBMCs foi avaliada através da determinação dos níveis de citocinas (TNF-α, IFN- γ, IL-2, IL4, IL-6, IL-10, IL-17). A avaliação para detecção de metabólitos secundários por Cromatografia em Camada Delgada (TLC) não revelou nenhum metabólito secundário no EPFCs. O EPFCs apresentou três bandas com aproximadamente 44,7 kDa, 37,8 kDa e 14,3 kDa, CSFTI (14,3 kDa) apresentou atividade inibitória de tripsina específica de 5.208 U/mg, ponto isoelétrico na faixa ácida (5,3) e ainda se apresentou como uma proteína termoestável. CsFTI mostrou homologia com uma endoquitinase encontrada nas folhas de Vitis vinífera, também da família VITACEAE. O CsFTI apresentou uma baixa toxicidade frente a PBMCs, apenas na maior concentração testada (100 μg/mL) foi positiva.  O padrão de imunomodulação foi similar para EPFCs e o CsFTI, onde ambos estimularam a liberação de IL-4, IL-6, IL-10 e TNF- α. A liberação de IFN-γ, IL-2 e IL-17 não foi alterada por EPFCs e CsFTI nas concentrações testadas.Em conclusão, de forma pioneira, foi isolado um peptídeo de baixo peso molecular, de natureza ácida e com alta atividade inibitória de tripsina obtido das folhas de C. sicyoides – CsFTI, Ainda, CsFTI exibiu uma atividade imunomoduladora, capaz de estimular citocinas anti-inflamatórias, com padrão de citocinas similar ao que é visto em condições protetora/terapêutica para o Diabetes melitus; uma alta liberação de TNF-α também foi observada.


MEMBROS DA BANCA:
Interno - 037.833.854-40 - EMMANUEL VIANA PONTUAL - UFPE
Interna - 1169175 - LUANA CASSANDRA BREITENBACH BARROSO COELHO
Presidente - 1134040 - MARIA TEREZA DOS SANTOS CORREIA
Externo à Instituição - ROBSON RAION DE VASCONCELOS ALVES
Notícia cadastrada em: 01/07/2022 16:26
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