Banca de QUALIFICAÇÃO: SILVIO ASSIS DE OLIVEIRA FERREIRA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : SILVIO ASSIS DE OLIVEIRA FERREIRA
DATA : 14/12/2021
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

Preparações de lectina pura (BmoLL) e de extrato de folhas de Bauhinia monandra para aplicações biológicas.

PALAVRAS-CHAVES:

Bauhinia monandra; lectina de folhas; IgG policlonal; biosensor
eletroquímico; cromatografia; citotoxidade; esquistossomose; moluscicida;
ecotoxicidade.

PÁGINAS: 116
RESUMO:

A lectina de folhas de Bauhinia monandra (BmoLL) foi previamente purificada por fracionamento com sulfato de amônio (F 0-60%) seguido por cromatografia de afinidade com gel de Guar. Para o estudo de BmoLL foi desenvolvido um anticorpo policlonal em coelho contra esta lectina; IgG anti-BmoLL foi purificada do antissoro em coluna Proteína A-Sepharose CL-4B. Em teste de imunodifusão dupla ocorreu precipitações de IgG anti-BmoLL com a BmoLL e extratos de outros tecidos de B. monandra com atividade de lectina previamente detectada. O IgG anti-BmoLL foi imobilizado na superfície do eletrodo de ouro para caracterização eletroquímica e piezoelétrica da interação anticorpo-BmoLL. Um imunossensor eletroquímico realizado com IgG anti-BmoLL e superfície eletrodo de ouro estimou a ligação BmoLL e seu potencial eletroquímico. Um imunossensor piezoelétrico também foi realizado com base em uma microbalança de cristal de quartzo (QCM) com uma superfície de ouro onde o IgG anti-BmoLL foi imobilizado para caracterizar o reconhecimento de BmoLL. O sistema eletroquímico foi sensível para avaliar interações anti-BmoLL IgG com diferentes concentrações de BmoLL. O imunossensor piezoelétrico com análise de injeção de fluxo (FIA) revelou uma diminuição de frequência (15 kHz) após a interação de BmoLL (454 μg/ml) com IgG anti-BmoLL (0,11mg/mL) indicando especificidade de anticorpos de antígeno. Em seguida, o ensaio piezoelétrico foi uma ferramenta potente para detecção de reconhecimento de anticorpos de antígeno. O potencial eletroquímico e piezoelétrica da interação anticorpo- BmoLL foi obtido para avaliar a ligação da galactose e IgG anti- BmoLL. Esses resultados revelam que a IgG anti-BmoLL não provocou nenhuma alteração na ligação de galactose pela BmoLL, indicando que ela purificada não tem afinidade pelos sítios de ligação de carboidrato de BmoLL. A manufatura de uma matriz com ligação cruzada da goma da sementa da Leucaena leucocephala (cross-linked matrix of Leucaena leucocephala seed gum, CLLSG), mostrou-se eficiente na purificação da BmoLL. A confecção da matriz foi simples, eficiente e de baixo custo na purificação comparado com as gomas comerciais. Sementes que tem na sua composição abundância de galactomananas possui um alto potencial de confecção de matrizes cromatográficas para purificação de lectinas que tenham afinidade a galactose. A BmoLL purificada teve ação citotóxica em uma relação de dose dependente, principalmente no tempo de 24h, tanto nas células de macrófagos J774A.1 e sarcoma-180 (S-180), pesquisas com outras linhagens de células são necessários para aprofundar o entendimento do mecanismo de ação da citotoxicidade das lectinas. Caramujos Biomphalaria glabrata são o principal vetor de esquistossomose no Brasil e a busca por moluscicidas naturais interrompendo o ciclo evolutivo do parasita é necessário. As plantas do gênero Bauhinia são amplamente encontradas em continentes endêmicos para a doença. Análise fotoquímica do extrato e fração das folhas de B. monandra revelou derivados cinâmicos, flavonóides e saponinas; concentração de proteína (21,2 mg/mL) e AHE (96,6) confirmou a presença de lectina. Na concentração de 100 μg/mL, o extrato obteve 88,7% de inviabilidade enquanto a 200 μg/mL, 100% de embriões inviáveis. Para os caramujos adultos, a concentração de 4000 μg/mL obteve 90% de mortalidade, porém de forma acumulativa ao longo de 96h. Na avaliação da ecotoxicidade, o extrato demonstrou alta mortalidade mesmo nas menores concentrações. Em conclusão, sugere-se que o extrato salino de B. monandra possa ser utilizado como alternativa no controle populacional do vetor, porém de forma pontual em localidades com alta endemicidade devido seu impacto no ambiente.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 037.833.854-40 - EMMANUEL VIANA PONTUAL - UFPE
Externo à Instituição - HALLYSSON DOUGLAS ANDRADE DE ARAUJO
Presidente - 1169175 - LUANA CASSANDRA BREITENBACH BARROSO COELHO