Banca de QUALIFICAÇÃO: TULÍBIA LAURINDO SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : TULÍBIA LAURINDO SILVA
DATA : 16/05/2022
LOCAL: Plataforma Google Meet
TÍTULO:

CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA E AVALIAÇÃO DE CITOTOXICIDADE E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE VENENO DE Leptodactylus vastus LUTZ 1930 (AMPHIBIA: LEPTODACTYLIDAE)

PALAVRAS-CHAVES:

Anuros; secreção cutânea; proteínas; peptídeos bioativos.

PÁGINAS: 119
RESUMO:

A primeira barreira entre os anfíbios e o ambiente é o tegumento, envolvido com funções como proteção mecânica, defesa contra patógenos, controle da passagem de água, respiração, percepção sensorial, coloração e camuflagem. Este tegumento é composto por epiderme e derme, onde há presença de glândulas na pele, uma característica comum entre todos os anfíbios. Algumas dessas glândulas são conhecidas como glândulas de veneno e secretam diferentes compostos bioativos. Leptodactylus vastus é uma rã endêmica do Brasil que ocupa diferentes biomas e pode ser encontrada em toda a região Nordeste brasileira. A presente tese como objetivo caracterizar o perfil proteico/peptídico da secreção de glândulas cutâneas de L. vastus (SLV), avaliar seu potencial como fonte de agentes citotóxicos contra células neoplásicas e sua atividade antimicrobiana contra bactérias e fungos patogênicos. A coleta de SLV foi realizada por meio de estimulação manual do tegumento com o animal imerso em um béquer contendo aproximadamente 60 mL de água Milli-Q. O material extraído (SLV) passou por processo de liofilização e foi estocado individualmente a -20º C. Para avaliar o perfil proteico de SLV, foram realizadas as seguintes etapas: dosagem de proteínas; determinação de atividade de tripsina, ensaio de hemaglutinação e teste de inibição de tripsina; e eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes (SDS-PAGE). As bandas observadas foram excisadas do gel, digeridas com tripsina e submetidas à análise por espectrometria de massas e as frações com maior intensidade de absorbância a 216 nm foram submetidas a espectrometria de massas. Também foi avaliada a atividade hemolítica de SLV sobre eritrócitos humanos tipo O+. A atividade antimicrobiana de SLV foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo contra cepas-padrão de Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis , Escherichia coli e Salmonella enterica serovar. Enteritidis, bem como cepas de Candida albicans,  Candida parapsilosis, Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. As frações obtidas com o fracionamento cromatográfico de SLV na coluna de fase reversa foram avaliadas quanto à capacidade de inibir o crescimento de Staphylococcus aureus e Escherichia coli. SLV apresentou uma concentração de proteínas de 2,25 mg/mL. No perfil eletroforético, foi possível observar a presença de sete bandas polipeptídicas. A análise revelou similaridade das proteínas presentes nas bandas 3, 4 e 5 com a enzima metanotiol oxidase das espécies de rãs aquáticas Xenopus tropicalis e Xenopus laevis. Não foi detectada a presença de tripsina, lectinas (atividade hemaglutinante) e inibidores de tripsina em SLV. O perfil obtido no fracionamento cromatográfico de SLV revelou diversos picos de peptídeos, os quais foram submetidos à espectrometria de massas. Os espectros obtidos estão sendo analisados. SLV não apresentou atividade hemolítica nem atividade antibacteriana frente S. aureus, E. faecalis, E. coli e S. enteritidis. SLV também não foi capaz de inibir o crescimento das cepas de fungos testadas. Da mesma foram, nenhuma das frações contendo peptídeos de SLV exibiu atividade inibitória sobre as bactérias testadas. Os próximos passos incluem a análise dos picos correspondentes aos peptpídeos e a avaliação de citotoxicidade contra células tumorais e efeitos de SLV sobre a coagulação sanguínea.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 037.833.854-40 - EMMANUEL VIANA PONTUAL - UFPE
Externa à Instituição - LIDIANE PEREIRA DE ALBUQUERQUE - UFPI
Externa ao Programa - 3245838 - THAMARAH DE ALBUQUERQUE LIMA