Banca de DEFESA: ABDÊNEGO RODRIGUES DA SILVA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ABDÊNEGO RODRIGUES DA SILVA
DATA : 28/01/2022
HORA: 14:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

PONTOS QUÂNTICOS CONJUGADOS AS LECTINAS DAS FOLHAS DE Schinus terebinthifolius (SteLL) E SARCOTESTA DE Punica granatum (PgTeL) COMO POTENCIAIS NANOFERRAMENTAS FLUORESCENTES PARA ESTUDOS GLICOBIOLÓGICOS

PALAVRAS-CHAVES:

Fluorescência, Bioconjugação, Fungos, Nanobiotecnologia, Lectinas.

PÁGINAS: 65
RESUMO:

Lectinas são proteínas/glicoproteínas que se ligam reversivelmente a carboidratos, uma vez ligadas, essas proteínas podem estimular uma gama de atividades biológicas. A PgTeL e SteLL são lectinas de origem vegetal, isoladas da  sarcotesta da romã (Punica granatum) e folhas de aroeira da praia (Schinus terebinthifolia), respectivamente. Devido a essa característica em reconhecer carboidratos, uma vez ligadas a fluoróforos, as lectinas podem formar interessantes sondas fluorescentes. Os Quantum dots (QDs), vem sendo largamente utilizados como nanossondas fluorescentes em investigações envolvendo alvos das lectinas em sistemas biológicos por possuírem propriedades físico-quimica intrínsecas como resistência a fotodegradação e superfície ativa para conjugações a diferentes biomoléculas. Nesse sentido, objetivo dessa pesquisa foi desenvolver novas nanoferramentas fluorescentes baseadas em QDs, PgTeL ou SteLL para estudos glicobiológicos. Utilizamos o Cryptococcus neoformans como modelo devido a sua complexidade e rica glicocomposição. Inicialmente foram realizadas as coletas dos materiais vegetais e purificações das lectinas, dosagem proteica (DP), atividade hemaglutinante (AHE) e focalização isoelétrica (pI). Posteriormente, síntese dos QDs carboxilados seguidos pelas conjugações em diferentes pHs bem como as caracterizações opticas, estabilidade das lectinas nos conjugados e AHE livres ou previamente inibidos com N-acetilglicosamina, fetuína, ovalbumina ou azocaseína. Como modelo biológico, foram analisadas as marcações nas leveduras de Cryptococcus neoformans por citometria de fluxo de microscopia de fluorescência. Os resultados gerais mostramque a PgTeL apresentou DP = 3,14 mg/mL; AHE = 163,06 e pI = 6,5; já a SteLL DP = 2,0 mg/mL; AHE = 1019;  pI= 5,7. A citometria revelou uma marcação superior a 99% em C. neoformans para ambos os conjugados, confirmadas pela intensa marcação na parede celular da levedura por microscopia de fluorescência. Adicionalmente, a partir da inibição dos conjugados com glicoproteínas foi observada uma diminuição considerável na marcação celular demonstrando especificidade do conjugado. De acordo com as caracterizações ópticas o conjugado QDs-PgTeL apresentarou um blueshift em relação ao QDs livre e o QDs-SteLL houve um redshift. Através da microplaca de fluorescência foi observada uma fluorescência relativa de 1262% e 374%, para QDs-PgTeL e QDs-SteLL, respectivamente, indicativos de eficientes conjugações. Como conclusãoforam obtidos conjugados para amplas as lectinas estáveis e que podem ser utilizados como uma nova nanoferramenta para investigação de glicoconjugados na superfície de patógenos

MEMBROS DA BANCA:
Externa ao Programa - 2199290 - BEATE SAEGESSER SANTOS
Interna - 1133984 - PATRICIA MARIA GUEDES PAIVA
Presidente - 1960817 - THIAGO HENRIQUE NAPOLEAO