IDENTIFICAÇÃO DE MOLÉCULAS ENVOLVIDAS NA MIGRÂNIA EM AMOSTRAS DE DURA-MATER E LÍQUIDO CEFALORAQUIDIANO
LCR. Ocitocina. CGRP. Oxido nítrico. Covid-19.
A enxaqueca, doença neurológica mais prevalente no mundo, é caracterizada por ataques de dor de cabeça unilateral e latejante, com sensibilidade visual, auditiva e ao movimento. Uma das principais causas de incapacidade em todo o mundo, a enxaqueca gera gastos sanitários anuais estimados em mais de US$ 20 bilhões. Várias moléculas estão envolvidas nos ataques de enxaqueca, gerando a ativação de algumas estruturas, particularmente da dura-máter. As moléculas que estão envolvidas nos ataques de enxaqueca podem estar circulando no LCR, dada sua circulação por todas as estruturas do sistema nervoso central. Com o surgimento do SARS-CoV-2 em 2019, notou-se sintomas compatíveis com a enxaqueca, levando a necessidade de investigar a presença do vírus no LCR. Com isso, objetivou-se mensurar as concentrações do CGRP, ocitocina e óxido nítrico e avaliar a expressão gênica de SARS-CoV-2 no LCR, além de otimizar protocolos comerciais de extração de RNA da dura-máter. Foram coletadas 76 amostras de LCR, de pacientes que iriam passar pela punção de lombar para procedimentos de rotina. Os grupos foram divididos em pacientes com enxaqueca, com covid-19 e do grupo controle, de ambos os sexos. As amostras foram coletadas no Hospital das Clinicas e no Laboratório Fernando Travassos. A quantificação das moléculas foi realizada através de Elisa, radioimunoensaio e quimiluminescência. Para realizar a otimização do protocolo de extração de RNA da dura-máter, as amostras foram obtidas de ratos Wistar e mantidas em dois estabilizadores diferentes. As amostras foram purificadas em quatro protocolos diferentes e o RNA foi avaliado quanto ao rendimento e pureza no NanoDrop 2000. O gene da beta-actina foi utilizado para analisar a expressão gênica. Houve diferença significativa na quantificação do oxido nítrico entre homens e mulheres com enxaqueca. Também foi significativamente diferente a comparação entre o grupo controle e os indivíduos com enxaqueca, em relação ao oxido nítrico. Com relação ao CGRP, houve diferença significativa na comparação entre homens e mulheres com enxaqueca. Na extração de RNA da dura-máter, a preservação do RNA foi semelhante em ambos os estabilizadores. O RNA purificado pelos protocolos baseados em membrana apresentou qualidade superior ao da purificação líquido-líquido. Este impacto foi observado na avaliação de três semanas usando RT-qPCR.