EXTRAÇÃO E AVALIAÇÃO DO COMPORTAMENTO DA IMUNOGLOBULINA G COMERCIAL UTILIZANDO SISTEMAS DE DUAS FASES AQUOSAS
IgG. Extração. Purificação. Hemoderivados. SDFA.
As imunoglobulinas (Igs) são os hemoderivados de maior consumo no mundo, sendo hoje o produto que direciona a indústria de hemoderivados. Atualmente no Brasil, a procura pelas Igs vem aumentando bastante devido ao aumento de casos de distúrbios autoimunes, principalmente os associados às infecções pelas arboviroses, sendo o uso dessas Igs fundamental ao seu tratamento. Muito embora a imunoglobulina G comercial, seja usada largamente em tratamentos, ainda apresenta um grau de impureza que corresponde em média a 2,4% da solução comercial importada. A principal metodologia de obtenção dessas proteínas plasmáticas é o método conhecido como "fracionamento do plasma com etanol frio", entretanto devido a sua alta concentração de etanol e baixo pH, essa metodologia pode provocar a desnaturação dos hemoderivados. Nesse sentido, o sistema de duas fases aquosas (SDFA) vem como uma alternativa de metodologia que permite um ambiente aquoso (85% - 99% de água) que acarreta a obtenção e purificação de biomoléculas em condições não desnaturantes. Extrair e purificar imunoglobulina G comercial por sistema de duas fases aquosas e estudar a recuperação e o particionamento da biomolécula foi um dos objetivos do estudo, além de verificar a presença de anticorpos para Dengue e Zika. As Igs utilizadas na presente pesquisa foram oriundas da Empresa Brasileira de Hemoderivados e Biotecnologia (HEMOBRÁS). Para o SDFA foi utilizado um planejamento fatorial 22 onde foram avaliadas a concentração do polietilenoglicol (PEG) de 4000g/mol e a concentração do sal (fosfato de potássio) sobre a extração das imunoglobulinas, tendo como variáveis respostas: o coeficiente de partição (K) e a recuperação (Y) das imunoglobulinas extraídas. Os resultados mostraram que o comportamento de partição das Igs dependeu diretamente da concentração de PEG e da concentração do sal utilizado. O ensaio que promoveu uma maior recuperação da biomolécula (Y=96,79%) foi obtido com o sistema PEG 4000 (12,5%) com uma concentração de fosfato de potássio à 10%, tendo as imunoglobulinas uma partição preferencial para a fase sal (K=0,15). O perfil eletroforetico das proteínas também demonstrou que após a partição, a mesma concentração de PEG e Sal de Fosfato utilizadas, conseguiu remover ainda mais a impurezas da solução comercial de Igs. Adicionalmente, o estudo conseguiu detectar presença de anticorpos contra o Zika Vírus nas soluções de IgG. Dessa forma o SDFA se mostrou uma técnica eficiente na extração e purificação de imunoglobulinas, com um baixo custo e um alto rendimento.