Banca de DEFESA: LAYLA CARVALHO MAHNKE

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : LAYLA CARVALHO MAHNKE
DATA : 30/08/2022
HORA: 09:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

Purificação de colagenase utilizando compósito magnético de azocoll e sua caracterização

PALAVRAS-CHAVES:

Protease; Partícula magnética; Víscera peixe; Colagenase

PÁGINAS: 88
RESUMO:

Colagenase (EC 3.4.24.3), enzima proteolítica capaz de degradar a tríplice hélice do colágeno foi purificada a partir de extratos brutos de vísceras do peixe (Oreochromis mossambicus) em apenas uma etapa utilizando o compósito magnético de óxido de ferro contendo o ligante azocoll adsorvido (MPs-Azocoll). A colagenase reconhece o azocoll presente no compósito e o complexo partícula-enzima é formado, sendo a seguir lavado para remover impurezas e outras proteínas que não interagiram com a partícula. Este complexo é desfeito após aumento da força iônica, obtendo a enzima purificada e a partícula magnética podendo ser reutilizada novamente. As enzimas purificadas através da MPs-Azocoll apresentaram, respectivamente, purificação de 16,6 vezes e rendimento de 33,1%. O peso molecular da enzima de O. mossambicus foi estimado em 30 kDa, corroborando com colagenases de outras espécies de peixe relatado na literatura. O reuso da MPs-Azocoll também se mostrou eficiente com purificações entre 15,9-14,9 vezes e rendimentos entre 33 a 31%. Os resultados de caracterização da MPs-Azocoll sugerem a presença do azocoll nas partículas, observado pelos picos característicos do colágeno no FTIR; através do deslocamento angular do DRX e na presença do elemento carbono na análise do EDX. Para aperfeiçoamento e otimização do processo de purificação, planejamento fatorial de 24 com análise estatística de variância (ANOVA) foi realizado. Os parâmetros analisados neste planejamento foram: (A) quantidade de partícula magnética usada na purificação, (B) quantidade de azocoll presente na partícula, (C) volume de extrato bruto e (D) tempo de incubação. O modelo estatístico se mostrou significativo de acordo com os valores de p e F. As variáveis estatisticamente significativas foram: (B) quantidade de azocoll presente na partícula e (D) tempo de incubação. A MPs-Azocoll otimizada foi testada na purificação de collagenase de vísceras do peixe (Scomber japonicus) e caldo de cultivo fúngico (Penicillium sp.) obtendo purificação de 20 e 22,2 vezes, com rendimento de 35,8% e 94,5% respectivamente. A colagenase caracterizada de S. japonicus foi determinada como uma serino-protease, alcalina, com melhor atividade no pH 8,0, e a 50°C. Estas características garantem uma alta possibilidade de aplicação da colagenase na indústria. Estes resultados demonstram que a partícula magnética contendo azocoll pode ser aplicada na purificação de colagenase em um processo de etapa única, empregando compósito de fácil síntese, baixo custo e reutilizável.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - DAVID FERNANDO DE MORAIS NERI - UNIVASF
Externo à Instituição - DIEGO DE SOUZA BUARQUE - UFRPE
Externo à Instituição - IAN PORTO GURGEL DO AMARAL - UFPB
Presidente - 1130271 - LUIZ BEZERRA DE CARVALHO JUNIOR
Externo ao Programa - 2356344 - RANILSON DE SOUZA BEZERRA