Preparação de conjugads de pontos quânticos com o inibidor de protease isolado das sementes de Enterolobium contortisiliquum (EcTI) para o estudo da biologia do câncer
inibidor de protease, células tumorais, nanopartícula, cancer.
As serinoproteases têm importante papel biológico em diversos mecanismos de
manutenção da vida e têm sua atividade controlada por inibidores. O EcTI é um inibidor
de serino protease purificado a partir de sementes de Enterolobium contortisiliquum
que tem, entre outras, notável atividade anticancerígena. Este estudo teve como
principal objetivo conjugar o EcTI com pontos quânticos (PQs) através de interações
covalentes e aplicar essa nanossonda para investigar sua interação com células
tumorais. Os PQs se destacam como nanossondas fluorescentes devido às suas
propriedades fotofísicas únicas, que os dão vantagens comparados aos corantes
convencionais. PQs e o conjugado (PQs-EcTI) foram caracterizados por espectroscopias
de absorção e emissão. A atividade inibitória do EcTI após a conjugação foi analisada, e
a conjugação foi avaliada por espectroscopia de correlação de fluorescência (FCS) e
ensaio de microplaca fluorescente (FMA). A interação do PQs-EcTI com as linhagens
celulares de adenocarcinoma cervical (HeLa) e mamário (MDA-MB-231) foram avaliadas
através de microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. O EcTI preservou sua
atividade inibitória após a conjugação. O FCS indicou que o PQs-EcTI apresentou um
diâmetro hidrodinâmico de cerca de 4 maior que os PQs sozinhos, indicando uma
conjugação bem-sucedida. Foi confirmado pelo FMA, que mostrou uma fluorescência
relativa de ca. 3,815% para o nanossistema, referente aos controles (somente PQs ou
EcTI). O conjugado interagiu com a membrana plasmática celular, e cerca de 62% das
células MDA-MB-231 e 90% das células HeLa foram marcadas na citometria de fluxo,
sugerindo as membranas dessas células expressão as de proteases pelas quais EcTI tem
afinidade em níveis diferentes. O conjugado PQs-EcTI pode ser considerado uma
nanoferramenta valiosa para estudo da interação desse inibidor com o câncer por meio
de técnicas baseadas em fluorescência.