Banca de DEFESA: JOSE PEDRO MARTINS BARBOSA FILHO

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JOSE PEDRO MARTINS BARBOSA FILHO
DATA : 20/02/2024
HORA: 14:00
LOCAL: 2º andar do Prédio das Pós-Graduações dos Centros CCS/CCM
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DOS PARÂMETROS HEMATOLÓGICOS E CITOTÓXICOS DE UMA ENZIMA FIBRINOLÍTICA COMO POSSÍVEL CANDIDATA AO TRATAMENTO DA TROMBOSE

PALAVRAS-CHAVES:

Aspergillus tamarii; coágulo de fibrina; coagulação; enzima proteolítica; terapia trombolítica; hemólise.

PÁGINAS: 105
RESUMO:

A formação de coágulos de fibrina, principal componente proteico dos coágulos sanguíneos está intimamente envolvida no desenvolvimento das doenças cardiovasculares e por isso, a trombose, desempenha um papel importante na patogênese de vários distúrbios cardiovasculares devido ao acúmulo desses coágulos que bloqueiam a passagem do fluxo sanguíneo. Diante disso, o objetivo desse estudo foi realizar a caracterização bioquímica e avaliar in vitro os aspectos da ação fibrinolítica, trombolítica e toxicidade da protease oriunda de Aspergillus tamarii Kita UCP 1279, uma vez que a intervenção de pesquisas nessa área pode ajudar no desenvolvimento de agentes trombolíticos mais seguros para o uso terapêutico. A protease com atividade fibrinolítica e purificada pelo sistema de duas fases aquosas e particionada para a fase sal foi avaliada quanto a caracterização bioquímica (pH e temperatura ótima e estabilidade, efeito de íons metálicos, inibidores e ação de surfactantes), determinação da atividade amidolítica, SDS-PAGE e zimograma de fibrina. Além disso, foi avaliado a atividade fibrinogenolítica da enzima e sua degradação trombolítica in vitro. Quantos aos testes toxicológicos foram realizados ensaios de citotoxicidade, determinação dos tempos de coagulação, atividade hemolítica e efeito da albumina sérica sobre a atividade enzimática. A protease fibrinolítica purificada foi caracterizada como uma serino protease e demonstrou uma temperatura ótima de 50ºC e se manteve estável até 120 minutos. O pH ótimo foi de 7,0 e estável por 36 horas. A atividade enzimática foi potencializada pela adição de Na⁺, Zn²⁺, Mg²⁺, Mn²⁺, K⁺ e inibida na presença dos íons Cu²⁺ e Fe³⁺ e pelos surfactantes Triton X-100 e dodecil sulfato de sódio, com uma diminuição de 37,66 e 62,35%, respectivamente. A enzima exibiu ainda uma maior especificidade para o substrato N-succinil-Gly–Gly–Phe-p-nitroanilida, um substrato típico de quimotripsina. A massa molecular da protease foi em torno de 90 kDa, exibindo também atividade sobre o zimograma de fibrina. A protease purificada não degradou o fibrinogênio, entretanto, promoveu uma degradação de 38,81% do trombo in vitro de fibrina após 90 minutos. Não houve nenhuma toxicidade frente as linhagens celulares testadas e na avaliação hematológica houve um discreto prolongamento do TP quando comparado com o grupo controle. Ainda, constatou-se que não houve interferência sobre a ação da trombina ou do fibrinogênio sobre o TT e em relação ao TPPa, observou-se o prolongamento sobre o tempo de coagulação à medida que aumentou a concentração da enzima. Por fim, foi verificado que nenhuma concentração utilizada demonstrou promover a lise das céluas sanguíneas e que a albumina promoveu um aumento da atividade em 31,70% da atividade enzimática. Mediante os resultados obtidos, a pesquisa revelou que o Aspergillus tamarii Kita UCP1279 possui potencial para a produção de enzimas fibrinolíticas, oferecendo uma alternativa promissora para o tratamento da trombose. A caracterização realizada demonstrou a estabilidade da enzima, que apresenta capacidade de degradar fibrina, ausência de toxicidade e sem alterações nos parâmetros hematológicos. No entanto, são necessários estudos adicionais para avaliar seu desempenho em organismos vivos, abrindo perspectivas para sua potencial aplicação como uma nova droga trombolítica.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - ALICE MARIA GONÇALVES SANTOS - UFPI
Presidente - 1173933 - ANA CRISTINA LIMA LEITE
Externa à Instituição - VIVIANE DO NASCIMENTO E SILVA ALENCAR - UFPE