Banca de QUALIFICAÇÃO: ALLANA MARIA DE SOUZA PEREIRA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ALLANA MARIA DE SOUZA PEREIRA
DATA : 19/03/2024
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE UMA PLATAFORMA MULTIPLEX DE CITOMETRIA DE FLUXO PARA O DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO E MOLECULAR DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR

PALAVRAS-CHAVES:

Imunologia. Bioinformática. Genosensor. Imunossensor. DNA. Leishmania (V.) braziliensis.

PÁGINAS: 100
RESUMO:

A Leishmaniose Tegumentar (LT) é uma doença reemergente e negligenciada que representa um
grave problema de saúde pública mundial. O diagnóstico precoce é considerado uma das
principais medidas de controle, entretanto, até os dias atuais não existe um método padrão-ouro.
O diagnóstico é realizado através da combinação de abordagens clínicas, epidemiológicas e
clínicas. Nesse cenário, a ideia de testes de diagnóstico multiplex vem se destacando como
interessante estratégia para doenças infecciosas. Em paralelo, a citometria de fluxo (CF) se
tornou uma tecnologia indispensável na pesquisa, devido a sua versatilidade. Destaca-se na área
de diagnóstico ao detectar diversos tipos de analitos, sobretudo proteínas, células, e ácidos
nucleicos. Em trabalhos anteriores, nosso grupo fez uso de ferramentas in silico, e identificou
uma proteína recombinante do parasita L.(V.) braziliensis (Lbrm 1140), com potencial para
implementação em diagnóstico. Dessa forma, o objetivo do presente é desenvolver um método
alternativo e eficaz para o diagnóstico da LT, baseado em um sistema multiplex que alia
abordagens sorológicas 0à molecular. Assim, pretende-se avaliar, simultaneamente, os títulos de
anticorpos e a identificação do material genético de Leishmania sp. a partir de amostras de
sangue de pacientes portadores da doença. Para tal, foram otimizadas todas as condições de
expressão e de purificação da proteína Lbrm1140. Após a obtenção da proteína, o acoplamento
da mesma com microesferas (beads) de poliestireno foi comprovado nos ensaios de CF com um
anticorpo primário anti-histidina, devido a presença de seis histidina na porção final da proteína.
O sistema foi testado frente a amostras de soro de pacientes portadores de LT e com amostras de
um grupo controle negativo para avaliar a diferença de fluorescência dos títulos de anticorpos
entre ambos os grupos. Para o sistema molecular, foi desenhada uma sonda de captura marcada
com biotina e uma sonda repórter marcada com um fluoróforo, ambas complementares a uma
região do DNA do parasito L. (V.) braziliensis. Como controle, foram utilizadas duas sondas
descritas no trabalho de Andreadou e colaboradores (2016), essas específicas para uma região do
DNA do parasito L. infantum. Com isso, foi realizada a otimização de todas as etapas de
montagem do sistema e avaliado seu comportamento por aquisição em CF. Nas etapas de
otimização, o sistema, quando testado frente a uma amostra do DNA do parasito, demonstrou
sinal positivo de fluorescência e o mesmo comportamento não foi observado quando utilizado
uma amostra de DNA não pertencente ao parasito, como controle negativo. Assim, mesmo sendo
necessários mais estudos, sobretudo com um número maior de amostras, a ideia de uma
plataforma multiplex sorológica e molecular por CF para LT é uma abordagem possível e
promissora para um diagnóstico rápido e eficaz.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - ANDRÉA TEIXEIRA DE CARVALHO
Externa à Instituição - ELIS DIONISIO DA SILVA - UFAM
Externa à Instituição - JANAINA DE FREITAS NASCIMENTO - USP