Banca de QUALIFICAÇÃO: INGRID ANDRÊSSA DE MOURA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: INGRID ANDRÊSSA DE MOURA
DATA : 31/01/2024
LOCAL: Remota - Google Meet
TÍTULO:

EXPRESSÃO E IMUNOGENICIDADE DE VACINAS DE DNA ADJUVANTADAS E CO—EXPRESSANDO ONCOGENES DO HPV16

PALAVRAS-CHAVES:

Vacinas Terapêuticas; Ácido Nucléico; HPV; Imunomoduladores; Vetor Bicistrônico.

PÁGINAS: 76
RESUMO:

O câncer cervical, que é associado ao papilomavírus humano é o quarto câncer mais comum na população feminina e é considerado um importante problema de saúde pública em todo o mundo. Apesar das vacinas profiláticas e estratégias de triagem existentes serem eficientes na prevenção de novas infecções, ainda existem desafios no tratamento de pacientes com câncer cervical estabelecido. Para tanto, técnicas que visam promover a regressão tumoral por meio de imunoterapia ativa têm despertado o interesse da comunidade científica. Nesse âmbito, as vacinas de DNA têm mostrado potencial devido suas características de fácil fabricação, segurança e capacidade de induzir respostas celulares contra os antígenos tumorais. No entanto, a eficácia dessas vacinas pode ser limitada, tornando necessárias otimizações.  Como resultado, o uso de sequências internas de entrada de ribossomos (IRES) e adjuvantes tem sido proposto para aumentar a expressão de proteínas em vacinas de DNA. Assim, o objetivo deste projeto é desenvolver uma vacina de DNA terapêutica baseada na co-expressão dos antígenos E5 e E7 adjuvantados para avaliar sua expressão e imunogenicidade em ensaios in vitro. A construção dos plasmídeos de expressão foi realizada por clonagem dos genes E5 e E7 do HPV16 com o adjuvante CP do Vírus X da batata nos vetores pGEM-T-Easy e pVAX1. Adicionalmente, para gerar o vetor bicistrônico, foi feita a síntese dos genes ligados pela sequência IRES no vetor pCDNA 3.1 para posterior subclonagem no vetor pVAX1. A expressão dos candidatos vacinais será avaliada pela transfecção de células HEK-293T com os plasmídeos e detecção por meio de qRT-PCR e western blot. Além disso, as construções serão validadas por uma nova metodologia in vitro de co-cultura de monócitos transfectados com linfócitos a fim de caracterizar a resposta imunológica induzida pelos candidatos vacinais. Os resultados preliminares, desde a amplificação dos genes até a confirmação dos clones de pVAX-HisE5CP e pVAX-HaE7CP por PCR de cultura e digestão enzimática, estabelecem a base para posterior avaliação da expressão e imunogenicidade. Adicionalmente, espera-se com a nova metodologia de ensaio de imunização in vitro, obter uma padronização a fim de possibilitar a utilização em outros projetos.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1453736 - ANTONIO CARLOS DE FREITAS
Externo ao Programa - 2067602 - ANTONIO ROBERTO LUCENA DE ARAUJO - nullInterno - 1203424 - MARCOS ANTONIO DE MORAIS JUNIOR