PERFIL FITOQUIMICO E AVALIACAO DO POTENCIAL BIOLOGICO DO EXTRATO AQUOSO DE Tetradesmus obliquus (Turpin) M.J.Wynne
apoptose, câncer, fibroblastos, microalgas
A microalga verde Tetratesdusmus obliquus apresenta uma rica composição fitoquímica que se relaciona com as atividades antiviral, antioxidante, antibacteriana, antihipertensiva e citotóxica frente a algumas linhagens tumorais. Essas propriedades tornam a espécie alvo de aplicações biotecnológicas na indústria farmacêutica e cosmética. No entanto, a elucidação do mecanismo de morte celular induzido por extratos aquosos da espécie sobre células neoplásicas é incipiente, além disso, sua ação fotoprotetora e cicatrizante ainda não foram avaliadas. Diante disso, o objetivo desse projeto foi identificar os principais fitocomponentes presentes no extrato aquoso de T. obliquus (EATO) e investigar suas atividades antioxidante, fotoprotetora, cicatrizante in vitro, citotóxica, bem como sua capacidade de induzir células tumorais à apoptose. Para isso, os fitoquímicos majoritários do EATO foram identificados qualitativamente e seu teor de proteínas e alcaloides totais foram quantificados. A atividade antioxidante do EATO foi avaliada pelos métodos de ABTS, DPPH e fosfomolibdênio. A capacidade fotoprotetora in vitro do extrato foi investigada pelo cálculo do fator de proteção solar (FPS). Foi realizado um screnning citotóxico para identificar o perfil citotóxico do EATO frente a diferentes linhagens não-neoplásicas (L-929, Hacat e VERO) e neoplásicas (HL-60, K-562, HCT-116, HT-29, MCF-7, NCIH-292). Posteriormente, foi verificada a influência do extrato sobre a migração de fibroblatos murinos (L-929) através do teste de fechamento de cicatriz in vitro. O efeito do extrato sobre a morfologia das células HL-60 foi avaliado por microscopia óptica após coloração por panótico rápido. Adicionalmente, a capacidade do EATO de induzir as células à apoptose foi investigada por citometria de fluxo utilizando a marcação com anexina-V e iodeto de propídio. A análise fitoquímica do EATO revelou a presença de alcaloides, saponinas, quinonas, proteínas, carboidratos redutores e glicosídeos. A quantificação de proteínas e alcaloides totais resultou em 1199,74 ± 108,50 µg/mL de proteínas e 16,98 ± 1,34 µg EqR/mL equivalentes de reserpina, respectivamente. O extrativo foi capaz de reduzir 50 % do radical DPPH e do complexo fosfomolibdênio nas concentrações de 226,41 ± 7,85 µg/mL e 744,88 ± 21,62 µg/mL, respectivamente. O EATO apresentou o FPS maior que 2, valor mínimo exigido para aplicação em cosmésticos multifuncionais. Ademais, o extrato não foi considerado citotóxico frente as células não-neoplásicas (L-929, VERO e Hacat), além disso, houve um aumento significativo na viabilidade e migração dos migração dos fibroblastos (L-929), em relação ao controle negativo. Para as linhagens neoplásicas, o extrato foi citotóxico frente as células de leucemia promielocítica aguda (HL-60) e adenocarcionoma pulmonar (NCIH-292), pois apresentou redução da viabilidade em valores menores ou iguais a 70 % após 72 h de tratamento com o EATO (62,5, 125 e 250 µg/mL), com destaque a linhagem HL-60 que apresentou os menores valores de viabilidade sob o efeito do extrato (125 µg/mL: 59,54 % ± 8,58 e 250 µg/mL: 36,46 % ± 6,11). O cálculo da concentração que inibe 50 % (CI50) das células HL-60 resultou em 129,00 µg/mL, já para a CI50 do extrato frente a linhagem L-929 foi igual a 467,00 µg/mL. O índice de seletividade demonstou que o EATO foi cerca de 3 vezes mais tóxico às células HL-60 do que as células não neoplásicas (L-929). A análise da morfologia das células HL-60, após 72 de tratamento, com o EATO (129 µg/mL) revelou a presença de alterações morfológicas sugestivas de apoptose (células em blebs, condensação da cromatina e picnose). Por fim, a análise da apoptose e necrose por marcação com anexina-V e iodeto de propídio permitiu confirmar que o extrato induziu às células HL-60 à morte celular por apoptose recente (CI50 1x: 14,83 %; CI50 2x: 75,36 %) e tardia (CI50 1x: 54,96 %; CI50 2x: 10,56 %). Esses achados reforçam a presença de bioativos no extrato aquoso de T. obliquus e sua relação com as atividades antioxidante, fotoprotetora, cicatrizante e citotóxica via indução da apoptose na linhagem leucêmica HL-60, destacando o EATO como fonte de biomoléculas com aplicações em cosméticos multifuncionais e fármacos antioneoplásicos.