As proteases colagenolíticas possuem a capacidade de hidrolisar colágeno nativo e desnaturado, sendo amplamente utilizadas em diversos segmentos biotecnológicos e biomédicos. Dentre essas enzimas, as colagenases microbianas destacam-se por sua diversidade bioquímica e alta susceptibilidade à manipulação genética, com os gêneros Streptomyces e Trichoderma apresentando vantagens significativas devido à termoestabilidade e elevado rendimento. Este trabalho visou a purificação e caracterização de uma colagenase obtida de Trichoderma isolado do Ecótono Caatinga-Cerrado Piauiense, aliada ao desenvolvimento de um biofilme cicatrizante inovador formulado à base de um blend polissacarídico com nanopartículas de prata e hidrolisado de colágeno. A produção enzimática foi realizada por fermentação em estado sólido, utilizando farelo de frutos de Pritchardia pacifica como substrato agroindustrial, evidenciando o potencial sustentável do processo. A enzima foi purificada por cromatografia de troca iônica aniônica em DEAE-Sephadex-50, apresentando temperatura ótima de 45°C, pH ótimo de 7,5 e estabilidade em diferentes condições de pH. Paralelamente, o biofilme foi desenvolvido utilizando quitosana e galactomanana (extraída de Cassia grandis) como matriz base. A formulação inclui bioativos obtidos de um processo de hidrólise enzimática envolvendo colágeno bovino Tipo IV e colagenase, associados a nanopartículas de prata sintetizadas por método verde. O biofilme resultante é biocompatível, biodegradável, hidrofílico e apresenta ação antibacteriana, além de potencial hipoalergênico, favorecendo a aceleração do processo cicatricial. Este produto apresenta aplicação promissora como curativo tópico de feridas e suporte para sistemas de liberação de drogas, reforçando o aproveitamento de recursos naturais e resíduos agroindustriais. O estudo destaca a integração de processos biotecnológicos e biomédicos, contribuindo para o fortalecimento da sustentabilidade e da inovação em saúde, indústria cosmética e biomateriais.