Banca de DEFESA: CIBELE CARINE SILVA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: CIBELE CARINE SILVA
DATA : 05/08/2025
HORA: 09:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

AVALIACAO DE INOVADORAS PROTEINAS QUIMERICAS DE LEISHMANIA (VIANNIA) BRAZILIENSIS EM PLATAFORMA DE CITOMETRIA DE FLUXO PARA O DIAGNOSTICO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA

PALAVRAS-CHAVES:

Antígenos. Epítopos. Anticorpo. Imunoensaios. Bioinformática.

PÁGINAS: 115
RESUMO:

A Leishmaniose Tegumentar (LT) é uma doença negligenciada e considerada um
grave problema de saúde pública mundial. Atualmente, o diagnóstico final depende
da combinação de dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais. Dadas as
limitações das técnicas sorológicas disponíveis, a citometria de fluxo (CF) surge
como uma abordagem sorológica alternativa. Contudo, embora a técnica apresente
alta sensibilidade, a especificidade permanece como uma limitação para a LT. Para
superar essas limitações, este estudo visa otimizar um método alternativo, baseado
em um sistema formado pelo acoplamento entre antígenos e microesferas (beads)
de poliestireno. Os antígenos foram identificados por ferramentas in silico sendo
caracterizadas quatro construções quiméricas denominadas, QLB1, QLB2, QLB3 e
QLB4. A caracterização físico-química dessas proteínas foi realizada utilizando a
ferramenta ProtParam e a antigenicidade foi avaliada com o preditor VaxiJen.
Células de E. coli das linhagens BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLysS e ArcticExpress
(DE3) foram utilizadas para otimizar a expressão proteica, com posterior
confirmação por western blot (WB). Os resultados in silico resultaram na obtenção
de quatro proteínas, todas apresentando epítopos imunogênicos, conforme predito
pelo VaxiJen. No contexto in vitro, os genes QLB1 e a variante QLB2, inseridos no
vetor de expressão pET21a, foram obtidos com sucesso, e suas sequências
confirmadas por sequenciamento. Entretanto, apesar das várias condições testadas,
a expressão proteica não foi confirmada por WB. Assim, para dar continuidade ao
objetivo proposto, foi utilizada uma proteína recombinante obtida em um trabalho
anterior do grupo, denominada Lbrm0750, a qual foi selecionada por ferramentas de
bioinformática, mediante uma análise do proteoma da L. (V.) braziliensis. Após a
purificação desta proteína e confirmação por WB, foram realizados ensaios
preliminares de CF, os quais confirmaram o acoplamento bem-sucedido às beads.
Além disso, a resposta antígeno-anticorpo foi comprovada por ensaios com um
anticorpo primário anti-histidina. Embora sejam necessários estudos futuros
aplicando amostras de soro de pacientes, a possibilidade de construção de um
sistema formado pelo acoplamento da proteína Lbrm0750 às beads demonstrou ser
possível e com potencial aplicação para o diagnóstico da LT.

 

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - JANAINA DE FREITAS NASCIMENTO - USP
Presidente - 2247580 - MICHELLY CRISTINY PEREIRA
Externo à Instituição - POLICARPO ADEMAR SALES JUNIOR - Fiocruz - PE