Banca de QUALIFICAÇÃO: CIBELE CARINE SILVA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: CIBELE CARINE SILVA
DATA : 19/03/2025
LOCAL: UFPE - MEET
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DE INOVADORAS PROTEÍNAS QUIMÉRICAS DE LEISHMANIA (VIANNIA) BRAZILIENSIS EM PLATAFORMA DE CITOMETRIA DE FLUXO PARA O DIAGNÓSTICO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA.

PALAVRAS-CHAVES:

Antígenos. Epítopos. Anticorpo. Imunoensaios. Bioinformática.

PÁGINAS: 50
RESUMO:

A Leishmaniose Tegumentar (LT) é uma doença negligenciada e considerada um grave problema de saúde pública mundial. Atualmente, o diagnóstico final depende da combinação de dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais. No contexto laboratorial, as abordagens mais utilizadas possuem limitações, sobretudo relacionadas à sensibilidade e especificidade. Dada as limitações, a citometria de fluxo (CF) surge como uma abordagem sorológica alternativa. Contudo, embora a técnica apresente alta sensibilidade, a especificidade permanece como uma limitação significativa para o diagnóstico da LT. Para superar essas limitações, este estudo
objetiva construir e avaliar proteínas quiméricas de Leishmania (Viannia) braziliensis para aplicação em plataforma de CF. Para isso, ferramentas in silico foram utilizadas para construir e caracterizar as construções proteicas, a partir da utilização de dez sequências peptídicas de Leishmania (Viannia) braziliensis. A caracterização físico-química foi realizada utilizando a ferramenta ProtParam e a antigenicidade foi avaliada com o preditor VaxiJen. Na sequência, metodologias in vitro foram aplicadas, incluindo digestão enzimática e ensaios iniciais de expressão proteica, com células de E. coli das linhagens BL21 (DE3) e BL21 (DE3) pLysS e posterior confirmação por western blot. Os resultados in silico resultaram na obtenção de quatro proteínas quiméricas (QLB1, QLB2, QLB3 e QLB4), todas apresentando epítopos imunogênicos, conforme predito pelo VaxiJen. Em relação à solubilidade, obtida com a ferramenta ProtParam, duas proteínas quiméricas (QLB1 e QLB2), foram preditas como solúveis, com valores de -0,033 e -0,065, respectivamente. Por outro lado, QLB3 e QLB4, foram preditas como insolúveis, apresentando valores de 0,370 e 0,158, respectivamente. No contexto in vitro, o gene QLB1 e a variante QLB2 foram obtidos com sucesso, e suas sequências foram confirmadas por digestão enzimática e/ou sequenciamento gênico. No entanto, em ensaios iniciais de expressão das proteínas QLB1 e QLB2, não foram observadas bandas nos tamanhos esperados de ~30kDa e ~28kDa, conforme observado em SDS-PAGE e confirmado por Western blot. Assim, embora otimizações adicionais sejam necessárias, os resultados in silico indicaram características promissoras. Isso sugere que ajustes no protocolo de expressão proteica podem alterar o cenário inicialmente obtido, possibilitando a aplicação das proteínas em futuras análises sorológicas.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - JANAINA DE FREITAS NASCIMENTO
Presidente - 2282209 - MARCELO ZALDINI HERNANDES
Externo à Instituição - POLICARPO ADEMAR SALES JUNIOR - Fiocruz - PE