Banca de DEFESA: ALLANA MARIA DE SOUZA PEREIRA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ALLANA MARIA DE SOUZA PEREIRA
DATA : 20/02/2025
HORA: 09:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE UMA PLATAFORMA MULTIPLEX DE CITOMETRIA DE FLUXO PARA O DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO E MOLECULAR DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR

PALAVRAS-CHAVES:

Imunologia. Microesferas. Proteína recombinante. Imunossensor. DNA. Leishmania (V.) braziliensis.

PÁGINAS: 177
RESUMO:

A Leishmaniose Tegumentar (LT) é uma doença negligenciada e reemergente, representando um
grave problema de saúde pública global. O diagnóstico precoce é fundamental para o controle da
doença, mas ainda não existe um método padrão-ouro. Atualmente, o diagnóstico é baseado em
uma combinação de abordagens clínicas, epidemiológicas e laboratoriais, com os testes
multiplex surgindo como uma estratégia promissora para doenças infecciosas. Em paralelo, a
citometria de fluxo (CF) se tornou uma tecnologia indispensável na pesquisa, devido a sua
versatilidade. Destaca-se na área de diagnóstico ao detectar diversos tipos de analitos, sobretudo
proteínas, células, e ácidos nucleicos. Em trabalhos anteriores, nosso grupo fez uso de
ferramentas in silico, e identificou uma proteína recombinante do parasita L. (V.) braziliensis
(Lbrm 1140), com potencial diagnóstico. O objetivo do presente trabalho consiste em
desenvolver um método alternativo e eficaz para o diagnóstico da LT, baseado em um sistema
multiplex que integra abordagens sorológicas e moleculares. A proposta visa avaliar
simultaneamente os títulos de anticorpos e a identificação do material genético de Leishmania
sp. a partir de amostras de sangue de pacientes portadores da doença. Para tal, foram otimizadas
todas as condições de expressão e purificação da proteína Lbrm1140. Após sua obtenção, o
acoplamento da proteína a microesferas (beads) de poliestireno foi confirmado por ensaios de
CF, utilizando um anticorpo primário anti-histidina, em razão da presença de uma sequência de
seis histidinas na porção C- terminal da proteína. A performance do sistema como ferramenta
diagnóstica foi avaliada utilizando amostras de pacientes com LT ativa e amostras de indivíduos
negativos para LT, provenientes de áreas endêmicas e não endêmicas. Para fins comparativos, o
desempenho da proteína foi confrontado com a abordagem baseada no uso de parasitos fixados
na identificação de pacientes por CF. Nesse contexto, a Lbrm1140 demonstrou ser um antígeno
mais eficiente, apresentando 100% de sensibilidade, enquanto o parasito fixado obteve apenas
22%. No entanto, a proteína apresentou reatividade de 28,57% em amostras negativas de áreas
endêmicas, indicando a necessidade de investigações adicionais para aprimorar a especificidade
do sistema. Para o sistema molecular, a estratégia envolveu o uso de beads de poliestireno
acopladas a duas sondas (captura/ biotina e repórter/Cy5) complementares direcionadas a uma
região específica do DNA-alvo. Todas as etapas de montagem do sistema foram otimizadas e o
seu desempenho foi avaliado e confirmado por CF. Durante os testes, o sistema demonstrou a
capacidade de distinguir com clareza as fluorescências emitidas na presença do DNA-alvo do
parasito, em comparação com amostras controle contendo DNA de um indivíduo saudável para a
doença, destacando a possibilidade como método diagnóstico. Por fim, ambos os sistemas
(sorológico e molecular) foram testados em uma aquisição multiplex na plataforma de CF,
utilizando amostras de pacientes. Os resultados demonstraram que ambos os sistemas
permanecem eficientes para a detecção da doença. Essas abordagens se mostram
complementares e evidenciam um grande potencial, representando um avanço significativo na
identificação de portadores de LT ativa. Contribuindo para o desenvolvimento de uma
plataforma tecnológica inovadora e sensível, com um impacto no aprimoramento do prognóstico
e manejo clínico dos indivíduos afetados.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - LUIZA CAMPOS REIS
Externa à Instituição - ANDRÉA TEIXEIRA DE CARVALHO - FIOCRUZ-MG
Externa à Instituição - ELIS DIONISIO DA SILVA - UFAM
Interna - 3649895 - MARIA DANIELLY LIMA DE OLIVEIRA
Presidente - ***.970.803-** - VALERIA PEREIRA HERNANDES - Fiocruz - PE