Potencial Biotecnológico de Lectinas Extraídas da Castanheira do Gurguéia (Dipteryx lacunifera Ducke) e sua Aplicação na Saúde.
Lectinas; Dipteryx lacunifera; Atividade hemaglutinante; Extração; Sistema de duas fases aquosas (PEG/Fosfato).
Lectinas são proteínas capazes de se ligar reversivelmente a carboidratos de forma não imunológica, com grande potencial na biotecnologia A Dipteryx lacunifera Ducke, conhecida como Castanheira do Gurguéia, fava de morcego, castanha de burro e garampara, pertencente à subfamília Faboideae (Papilionoideae), com predominância nos cerrados do sul e centro-sul do Maranhão, Piauí e Bahia. Este estudo descreve a extração de uma lectina produzida pelas folhas da castanheira do Gurgueia (Dipteryx lacunifera Ducke) e sua pre purificação pelo sistema de duas fases aquosa (polietilenoglicol/fosfato) A pesquisa foi aprovada pelo comitê de ética, sob o CAAE: 81629024.80000.5208. Um modelo de planejamento fatorial (24) foi utilizado para avaliar a influência da massa molar do polietilenoglicol (PEG) (400–20000 g/mol), da concentração de PEG (12,5–17,5% p/p), da concentração de fosfato (10–15% p/p) e do pH (6–8) na partição diferencial, no fator de purificação e no rendimento da lectina. A concentração de polímero e sal foram as variáveis mais importantes que afetaram a partição da lectina e foram utilizadas para encontrar o fator de purificação ótimo pelo planejamento experimental de Box-Behnken em conjunto com a metodologia de superfície de resposta. Dentre as partes da planta somente as folhas apresentaram atividade hemaglutinante,256 U.H (Unidades de Hemaglutinação) A lectina mostrou afinidade por todos os tipos os tipos sanguíneos testados. O tampão fosfato de sódio 0,1M (pH 6) foi o mais eficaz, atingindo 2048 U.H (Unidades de Hemaglutinação). A temperatura ótima de estabilidade para o extrato bruto foi de 60 °C, mantendo atividade de 1024 U.H. por até 120 minutos. A atividade hemaglutinante foi potencializada pela adição dos íons Ca2+ e Mg2+, e inibida na presença de Na+ e K+. Em testes com carboidratos a lectina manteve atividade frente a todos os açúcares avaliados. Além disso, exibiu baixa atividade hemolítica, indicando reduzida toxicidade, e apresentou efeito citotóxico dose- dependente sobre células da linhagem MDA-MB-231(carcinoma mamário humano) mantendo, viabilidade em fibroblastos L929. A lectina foi extraída utilizando o sistema de duas fases aquosas (SDFA) PEG/Fosfato obtendo-se a melhor condição de extração com 12,5% de PEG 20000 g/mol, 15% de Fosfato (p/p) e pH 8,0. Nessa condição, a lectina particionou para a fase rica em PEG, apresentando coeficiente de partição 256, fator de purificação 11,20 e recuperação de 540%. Como perspectivas futuras, pretende-se analisar a influência de parâmetros físico-químicos (temperatura, pH, íons, surfactantes e carboidratos) sobre a atividade da lectina pre purificada, bem como determinar a atividade hemolítica e avaliar a toxicidade frente a cultura de células; Também serão investigados os efeitos da lectina pre purificada sobre a coagulação sanguínea, por meio dos testes de Tempo de Protrombina (TP), Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPa) e Tempo de Trombina (TT), além de avaliar suas atividades biológicas, como ação antibacteriana e antifúngica. Esses resultados preliminares evidenciam o potencial biotecnológico da lectina da Dipteryx lacunifera Ducke e ressaltam a importância de explorar atividades nesta espécie ainda pouco investigada.