Banca de QUALIFICAÇÃO: FÁBIO FARIAS GALVÃO JÚNIOR

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: FÁBIO FARIAS GALVÃO JÚNIOR
DATA : 05/12/2024
LOCAL: UFPE - MEET
TÍTULO:

Desenvolvimento de uma linhagem repórter de Trypanosoma cruzi para utilização em ensaios pré-clínicos

PALAVRAS-CHAVES:

doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; bioluminescência; luciferase; luciferina.

PÁGINAS: 63
RESUMO:

A doença de Chagas é uma parasitose causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, com grande impacto global, afetando cerca de 70 milhões de pessoas no mundo, sendo considerada endêmica na América Latina. Até o momento, apenas dois fármacos, benzonidazol e nifurtimox, são utilizados como tratamento de referência
contra a doença. No entanto, a variedade de efeitos adversos desses medicamentos, associados à baixa eficácia na fase crônica da doença, dificultam o processo de cura. A evidente necessidade de novos tratamentos enfrenta desafios relacionados aos métodos convencionais de triagem de novos fármacos. Seria oportuno, assim, a utilização de uma abordagem que auxilie a superar esses desafios. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar o uso de cepas transgênicas de T. cruzi que expressam o gene da GFP e da luciferase, visando sua aplicação em ensaios pré- clínicos. Para isso, foi construído o plasmídeo pROCK_LUC_NEO, derivado do pROCK_GFP_NEO, e ambos foram utilizados para transfecção de epimastigotas das cepas Y e Colombiana. A identificação da transgenia dos organismos foi confirmada por análise de microscopia de fluorescência. Também foi realizada citometria de fluxo para definir o percentual de fluorescência da cultura dos mutantes expressando GFP. Os resultados desta análise apresentaram percentuais de fluorescência próximos de 96% para a cepa Y-GFP e 66% para a cepa Colombiana-GFP. Quanto às cepas transgênicas que expressam o gene da luciferase (Y-Luc e Colombiana-Luc), três densidades distintas foram avaliadas, para verificar a intensidade de luminescência em diferentes condições. Ao comparar as cepas, os resultados da medição de uminescência demostram níveis mais elevados nas cepas transgênicas em relação às respectivas cepas selvagens. A diferença percentual entre os valores obtidos das cepas Colombiana-Luc e Colombiana supera 1,19 x 10^8 e é superior a 2,99 x 10^8 entre as cepas Y-Luc e Y. A partir desses resultados, é possível avançar para testes in vitro adicionais, incluindo a avaliação da infectividade das cepas e a testagem frente ao fármaco de referência, antes de prosseguir para os estudos in vivo. Esses dados preliminares indicam o potencial das cepas desenvolvidas para utilização em ensaiospré-clínicos.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - LAURA HELENA VEGA GONZALES GIL - Fiocruz - PE
Interna - ***.970.803-** - VALERIA PEREIRA HERNANDES - Fiocruz - PE
Externo à Instituição - WALTER LINS BARBOSA JUNIOR - Fiocruz - PE