Banca de DEFESA: GUILHERME ALBUQUERQUE DE FRANCA MONTEIRO

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: GUILHERME ALBUQUERQUE DE FRANCA MONTEIRO
DATA : 10/02/2025
HORA: 09:30
LOCAL: Departamento de Genética
TÍTULO:

CARACTERIZAÇÃO DA INTERAÇÃO DE HELICASES DO TIPO DEAD-BOX DE TRYPANOSOMA BRUCEI COM COMPLEXOS DO TIPO eIF4F DE INICIAÇÃO DA TRADUÇÃO

PALAVRAS-CHAVES:

Tripanosomatídeos; Regulação gênica; Interação proteína-proteína; DHH1; DED1; DBP2B 

PÁGINAS: 120
RESUMO:

Em eucariotos, as RNA helicases do tipo DEAD-box desempenham diversos papéis ligados ao metabolismo dos RNAs, atuando desde o núcleo até o citoplasma, sendo fundamentais na tradução dos mRNAs, onde podem atuar na sua iniciação junto aos complexos do tipo eIF4F. Nos tripanosomatídeos, como Trypanosoma brucei, diversos destes complexos podem interagir com diferentes RNA helicases, o que pode levar a padrões distintos de tradução. Nesses organismos, estudos identificaram que o complexo baseado nas subunidades EIF4E4/EIF4G3 interage especificamente com uma única RNA helicase, chamada EIF4AI, típico parceiro de complexos eIF4F em outros eucariotos. Resultados preliminares mostraram que outro complexo de tripanosomatídeos, o EIF4E3/EIF4G4, parece coprecipitar com as RNA helicases DED1-2 e DBP2B, enquanto o complexo EIF4E6/EIF4G5, pode ter interação com a helicase DHH1. Este trabalho buscou analisar em detalhes as supostas associações das três helicases citadas acima de T. brucei com complexos do tipo eIF4F específicos, a partir de ensaios de coprecipitação, visando também identificar outros possíveis parceiros funcionais que possam esclarecer o modo de ação destas proteínas. Para isso, genes codificando estas helicases foram clonados em sistema induzível por tetraciclina e em seguida transfectados em células procíclicas de T. brucei. A expressão das respectivas proteínas, todas marcadas com o epítopo HA, foi avaliada com anticorpo anti-HA, confirmando que essas RNA helicases permanecem expressas durante a fase exponencial de crescimento do parasita. Lisados celulares confirmaram a presença das proteínas em fração citoplasmática solúvel, sendo em seguida realizada a sua imunoprecipitação e identificação por espectrometria de massas de polipeptídeos coprecipitados. Os dados obtidos evidenciaram uma coprecipitação específica de proteínas com as helicases, incluindo subunidades de complexos do tipo eIF4F e outros fatores de iniciação da tradução. Entre esses fatores, as subunidades do complexo eIF3 mostram-se associadas as três RNA helicases investigadas. A DED1-2 coprecipitou com o EIF4E4/EIF4G3 e curiosamente apresentou um perfil de interações com proteínas associadas a regulação do metabolismo energético, sugerindo uma possível conexão com vias metabólicas do parasita. Por outro lado, a DHH1 não apenas coprecipitou com o EIF4E4/EIF4G3, mas também com o EIF4G4 e subunidades do complexo NOT de deadenilação, indicando um papel mais proeminente da DHH1 na regulação da tradução geral do parasita, principalmente através do controle de meia-vida de mRNAs. Em contrapartida, a DBP2B também coprecipitou o EIF4G4, mas também o EIF4E5 e EIF4E6, juntamente com proteínas parceiras como PARN-1, MTR4 e RBG2, sendo a primeira envolvida em processos de deadenilação de mRNAs, enquanto a segunda e a terceira com a maturação de rRNAs e montagem de ribossomo, respectivamente. Com isso, é possível que a DBP2B apresente função moonlighting, atuando tanto na tradução de mRNAs como em processos de degradação/maturação de mRNAs e rRNAs. Esses achados destacam as funções distintas dessas helicases, atuando na tradução e no metabolismo de RNAs, fornecendo novas informações e estabelecendo uma base para futuras pesquisas que busquem identificar alvos específicos na tradução do T. brucei, com intuito de utilizar como estratégia de combate a patologias causadas por esses e outros parasitas.

MEMBROS DA BANCA:
Interna - ***.952.434-** - ISABELLE FREIRE TABOSA VIANA - OUTRA
Externa à Instituição - ANNA JESSICA DUARTE SILVA - UFPE
Externa à Instituição - MARIA HELENA NEVES LOBO SILVA