Caracterizacao biofisica e molecular de proteinas sinteticas mimeticas de anticorpos dirigidas contra proteinas tumorais de glioma maligno
Gliomas, Dicroísmo Circular e Termoforese em Microescala.
O glioma é um tumor originado nas células da Glia. O diagnóstico específico e a sua localização são fatores que influenciam no prognóstico, e os tratamentos utilizados atualmente são baseados em radioterapia, quimioterapia, seguido de uma intervenção cirúrgica. Sendo realizado com auxílio de moléculas fluorescentes atuando na marcação dessas células, entretanto, o escape dessa marcação acaba levando a processos recidivos. Com isso, nossa hipótese é que miniproteínas sintéticas miméticas de anticorpos, desenhadas racionalmente interagem com proteínas expressas por células tumorais in vitro com alta afinidade. Nosso trabalho buscou produzir miniproteínas que pudessem ser utilizadas como uma alternativa eficaz para marcação das células do glioma, buscamos a caracterização biofísica das miniproteínas, avaliando também seu potencial de ligação e reconhecimento celular. Para isso, realizamos a expressão da miniproteína, seguidos de ensaios para purificação por cromatografia de afinidade por íons metálicos, dicroísmo circular (CD) para avaliação da sua estrutura, termoforese em microescala (TMS) para verificação do potencial de afinidade e citometria de fluxo, utilizando a proteína produzida e a linhagem SH-SY5Y. Nas avaliações da miniproteína 3HB17241 que foi desenhada especificamente para ligar-se ao receptor de IL-13 que é super expresso em células de glioma, os experimentos com CD conseguiram comprovar que a estrutura permanece estável apesar das variações de temperatura até 95°C, já a MST apresentou um KD 3,66 de nM de o que comprova o seu alto potencial de afinidade para o alvo determinado. Os ensaios de Citometria mostram que até em concentrações mais baixas, é possível detectar o reconhecimento. Esses resultados preliminares mostram que a 3HB17241 apresenta uma alta estabilidade conformacional, com um bom índice de afinidade e capacidade de reconhecimento, o que nos direciona para o desenvolvimento dos próximos passos desse estudo.