DESENVOLVIMENTO PRELIMINAR DE PROTOCOLOS PRÉ-ANALÍTICOS, MOLECULARES E BIOQUÍMICOS PARA ANÁLISE FECAL INTEGRADA EM CRIANÇAS COM PARALISIA CEREBRAL GRAVE
Fezes; Microbioma Gastrointestinal; Multiômica; Paralisia Cerebral; RNA Ribossômico 16S
A paralisia cerebral grave (GMFCS IV e V) gera severas repercussões motoras, gastrointestinais e nutricionais que impactam diretamente o ambiente intestinal. Nesse cenário, a matriz fecal desponta como material biológico estratégico para investigações integradas, embora a carência de protocolos padronizados comprometa a reprodutibilidade de análises multiômicas nessa população vulnerável. Desenvolver e sistematizar uma proposta técnico-tecnológica de análise fecal integrada por meio de procedimentos operacionais padrão e realizar a validação molecular preliminar do fluxo de DNA. O estudo foi estruturado em formato multiproduto, associando revisões teóricas e cienciométricas com a elaboração de Procedimentos Operacionais Padrão (POPs) direcionados à coleta, aliquotagem e preservação de amostras para metagenômica, metatranscriptômica, metabolômica, metaproteômica, viabilidade e análise redox. A etapa experimental concentrou-se na validação do fluxo molecular em amostras-piloto, envolvendo extração orgânica de DNA, controle de qualidade espectrofotométrico e eletroforético, e amplificação parcial do gene 16S rRNA. Os POPs consolidaram rotas pré-analíticas integradas baseadas no princípio de freeze-thaw zero. A etapa laboratorial demonstrou a viabilidade técnica inicial da rotina molecular, obtendo concentrações mensuráveis de DNA fecal. Apesar de limitações identificadas na pureza espectrofotométrica (razões A260/A280 entre 1,07 e 1,16) e do padrão fragmentado no gel, o material recuperado mostrou-se funcionalmente viável, gerando amplicons nítidos do gene 16S rRNA na condição otimizada de 56 °C por 28 ciclos. O estudo estabelece uma plataforma metodológica reprodutível e rastreável adaptada à realidade clínica da paralisia cerebral grave. A validação do componente molecular confirma a exequibilidade do fluxo de DNA e fornece uma base operacional segura para subsidiar o sequenciamento metataxonômico e a aplicação futura das demais camadas ômicas planejadas.